人尿促性腺激素(HMG)

出处：按学科分类—工业技术 企业管理出版社《精细化学品制备手册》第309页（1745字）

制法

(1)处理 用搪瓷桶或洁净的塑料桶收集更年期妇女尿液(一定要新鲜，气温高时，可加防腐剂；采集尿液最好用更年期妇女下半夜至清晨的尿液)，用50%质量分数的盐酸将配方量的尿液调节pH值至3～4左右，静置20min后，用双层纱布过滤，将滤液滤入吸附缸中。

(2)吸附滤液 用4%氢氧化钠溶液调节pH值至4～5，加入质量分数2%～3%的高岭土，搅拌均匀。继续搅拌吸附1～1．5h，过滤(或离心)，弃去上清液，收集吸附物，挤压至干。

(3)解析 先用酸性水将以上吸附物冲洗几次，然后吊滤至干。将吸附物移入搪瓷缸中，加入1～2倍量的4%氢氧化钠溶液，在15℃左右搅拌20～40min使HMG充分解析，然后过滤除去沉淀，收集滤液。用50%的工业盐酸调节pH值至8．5左右，静置30～60min，过滤(或离心)，弃去沉淀(杂蛋白)，收集滤液。

(4)丙酮沉淀 将滤液用0．6%的乙酸调节pH值至4～6，然后加入2倍量的丙酮，静置过夜。过滤，收集HMG湿品，滤液可回收丙酮。

(5)溶解 在HMG湿晶中加入1～2倍量的蒸馏水，搅拌使其完全溶解，然后在离心机上分离，弃去杂物，收集滤液。在滤液中，加入0．1倍体积的0．5%氯化钠溶液，用50%盐酸调节pH值4～6，加入2倍量左右95%冷乙醇，搅拌均匀，静置等分层后，过滤，收集上清液。

(6)乙醇沉淀 把收集的上清液移入另一沉淀缸中，加等量左右的0．5%氯化钠溶液，再加入95%乙醇至溶液中乙醇浓度达70%～75%，在冷处静置过夜。虹吸除去清液(供回收乙醇用)，滤干沉淀物。

(7)干燥 将沉淀物用95%乙醇洗2～3次，吊干，然后放入石灰缸或干燥器中干燥，即得HMG粗品。

(8)HMG粗品精制

①溶解 先把HMG精品溶于pH值为7．0的磷酸氢二钠和磷酸二氢钠(1∶1质量比)组成的缓冲液中，然后在离心机上除去沉淀，收集清液准备上柱进行分离。

②DEAE－C柱层析 将预处理过的DEAE－C用pH值为7．0的磷酸氢二钠和磷酸二氢钠(1∶1质量比)组成的缓冲液浸泡平衡4～5h，然后装入2cm×40cm的玻璃柱中，平衡5～6h后，将HMG溶液上柱。上柱流速控制在1．5ml／min，上柱后用同种磷酸钠缓冲液洗脱，收集洗脱液，最后透析除盐。

③人造沸石柱层析 先把人造沸石经pH值为5．4的乙酸铵缓冲液平衡后装入2cm×40cm玻璃柱中，将以上透析液上柱。用上述乙酸铵缓冲液洗脱，流速1．5ml／min，等流出液280nm光密度在0．05以下时，改用10%乙酸铵和乙醇(质量比为1∶2)洗脱，分管收集，收集蛋白峰(即在280nm处有最大吸收值)于搪瓷桶中。

④乙醇沉淀 在收集的蛋白溶液中，加入3倍体积的冷乙醇搅拌均匀，置4℃保存过夜，然后在离心机上离心。收集沉淀，上清液可供回收乙醇用。

⑤干燥 把上述沉淀物包扎好后，放入石灰缸中干燥，也可采用真空干燥，即得HMG精制产品，产品出售前应置于4℃保存。

HMG具有促进卵巢类固醇激素分泌、排卵和黄体生成、酮分泌及精子生长等功能。临床上主要用于治疗妇女功能性不排卵引起的不孕症，男性因激素水平低所致的精子过少、精子活力不足以及妇女月经失调、性机能失调和习惯性流产等疾病；在畜牧水产业中，用于治疗家畜不妊娠，提高受胎率及淡水养鱼的催情增殖。