蛋白酶－酰化酶(从猪肾中提取)

出处：按学科分类—工业技术 企业管理出版社《精细化学品制备手册》第321页（1511字）

制法

(1)处理 将新鲜或冷冻猪肾用清水洗干净，除掉脂肪及结缔组织(冷冻肾，应解冻后再处理)，然后切成小块，用绞肉机绞成糜浆。

(2)提取 将糜浆移入搪瓷缸中，加入2倍体积的4℃清水，在4℃左右搅拌提取30min，然后置于冷冻离心机中在3000r／min的转速下离心30min，分出离心液，残渣再同样提取3次，合并离心液，用双层纱布压滤，收集滤液备用。

(3)除杂蛋白 将滤液移入搪瓷桶中，用1∶6(质量比)盐酸(即1kg盐酸加5kg水)调节pH值至5．0左右，然后用离心机(4000r／min)离心30min，收集离心液，马上用1∶6(质量比)的盐酸调节pH值至6．5。

(4)盐析 量取pH值已调至6．5的溶液，倒入另一搪瓷桶中，在搅拌条件下，每升加266g硫酸铵粉末，使硫酸铵充分溶解。随时校正pH值为6．5，然后静置过夜，次日虹吸出上清液(用于制备酰化酶Ⅱ)，盐析物吊干(在4℃条件下)。

(5)透析 把盐析物用少量的无离子水使其完全溶解，然后装入透析袋放入塑料桶中，用无离子水透析，经常更换无离子水，然后取少许透析液，加几滴1mol／L的氯化钡溶液，振荡后静置片刻，如无白色沉淀(即硫酸钡)即透析完毕。如有白色沉淀，证明仍有硫酸根存在，应再透析至无白色沉淀为止。然后于离心机上除去变性蛋白，收集离心液，即为酰化酶Ⅰ粗品。

(6)分级分离 把透析液移入塑料桶中，用少量的4℃无离子水稀释，在4℃条件下或冰盐水中(冰盐浴按100g冰、33g盐配制)进行。用1∶10(质量比)的盐酸调节pH值至6．0，在搅拌下，加入0．5倍体积的冷丙酮(－15℃)，然后马上于离心机上(4000r／min)离心20min，收集黄色上清液，装入另一塑料桶中。在4℃条件下，慢慢加入0．6倍体积的冷丙酮(－15℃)，立即于离心机上(4000r／min)离心20min，收集沉淀物，上清液用于回收丙酮。

(7)透析、干燥 将沉淀物用少量无离子水溶解，装入透析袋中用0．01mol／L、pH值为7．0的磷酸钠盐缓冲液透析2～3h(在4℃条件下)，然后将透析液于离心机上(4000r／min)离心20min，除去不溶物，收集离心液。将其冰冻，干燥，即得酶粉。产品可置于干燥器中，于20℃条件下保存。

0．01mol／L、pH值7．0的磷酸钠盐缓冲液的配制方法是：量取61ml浓度为0．1mol／L的磷酸氢二钠溶液加39ml浓度为0．1mol／L的磷酸二氢钠溶液，混匀后用pH计校正pH值。

在提取过程中，调节pH值应准确，否则会影响酶的活性和产率。用丙酮分级分离时，应用滴管慢慢滴入酶液中，并马上离心分离。该酶对热不太稳定，在提取过程中应在低温下进行，避免酶变性。

本品是一种蛋白酶，广泛分布在许多动物的多种脏器组织中，肾脏中的含量最高，所以以肾脏为原料提取。酰化酶Ⅰ在酶工业中是应用较广的一种水解蛋白酶。在制药工业中，被应用于大规模分离各种入工合成的消旋氨基酸。