食品中硒的测定方法

出处：按学科分类—工业技术 中国轻工业出版社《食品添加剂分析检验手册》第216页（3344字）

化学名：亚硒酸钠(Sodium Selenite)

分子式：Na₂SeO₃

相对分子质量：172．95(无水物)，263．026(五水物)

一、硒的鉴别方法

1．试剂和溶液

1．1 盐酸。

1．2 0．5%二氨基联苯胺盐酸溶液。

2．操作步骤

2．1 取0．5mL本品溶液(0．1+100)，加2滴浓盐酸和3滴0．5%二氨基联苯胺盐酸溶液，混匀，放置5min，呈黄色。

2．2 用铂丝沾本品溶液，于无色火焰中燃烧，火焰呈黄色。

二、食品中硒的测定方法

1．原理

样品经混合酸消化后，硒化合物被氧化为四价无机硒(Se⁴⁺)，与2，3－二氨基萘(2，3－diaminonaphthalene，简称DAN)反应生成4，5－苯并苤硒脑(4，5－benzo piaselenol)，其荧光强度与硒的浓度在一定条件下成正比。用环己烷萃取后于激发光波长376nm，发射光波长520nm处测定荧光强度，与绘制的标准曲线比较定量。本法检出限为3ng。

2．试剂和溶液

2．1 环己烷。

2．2 硝酸。

2．3 过氯酸。

2．4 盐酸。

2．5 氢溴酸。

2．6 1+9盐酸溶液 取10mL盐酸，加90mL水。

2．7 (1+1)氨水。

2．8 (5+95)去硒硫酸 取5mL去硒硫酸，加于95mL水中。

去硒硫酸：取200mL硫酸，加于200mL水中，再加30mL氢溴酸，混匀，置沙浴上加热蒸去硒与水至出现浓白烟，此时体积应为200mL。

2．9 0．2mol／L EDTA 称37gEDTA二钠盐，加水并加热溶解，冷却后稀释至500mL。

2．10 10%盐酸羟胺 称取10g盐酸羟胺溶于水中，稀释至100mL。

2．11 混合酸 硝酸+过氯酸(2+1)。

2．12 0．1%2，3－二氨基萘(纯度95%～98%)需在暗室配制称取200mgDAN于－带盖三角瓶中，加入200mL0．1mol／LHCL溶液，振摇约15min，使其全部溶解。约加40mL环己烷，继续振摇5min，将此液转入分液漏斗中，待溶液分层后，弃去环己烷层，收集DAN层溶液。如此用环己烷纯化DAN，直至环己烷中的荧光数值降至最低时为止(纯化次数视DAN纯度不同而定，一般约需纯化3～4次)。将提纯后的DAN溶液储于棕色瓶中，约加1cm厚的环己烷覆盖溶液表面。置冰箱中保存。必要时再纯化1次。

2．13 硒标准溶液。

2．13．1 100μg／mL硒标准储备液：精确称取100．0mg元素硒(光谱纯)，溶于少量硝酸中，加2mL过氯酸，置沸水浴中加热3～4h，冷却后加入8．4mL盐酸，再置沸水浴中煮2min。准确稀释至1000mL，其盐酸浓度为0．1mol／L。此储备液浓度为100μg／mL。

2．13．2 0．05μg／mL硒标准使用液：将储备液用0．1mol／LHCl溶液稀释，使含硒为0．05μg／mL。于冰箱中保存。

2．14 0．02%甲酚红指示剂称取50mg甲酚红溶于水中，加(1+1)氨水1滴，待甲酚红完全溶解后加水稀释至250mL。

2．15 EDTA混合液取2．9和2．10液各50mL，混匀，再加5mL(2．14)溶液，用水稀释至1L。

3．仪器

3．1 实验室常用设备。

3．2 荧光分光光度计。

4．测定方法

4．1 样品处理及消化。

4．1．1 粮食：样品用水洗3次，60℃烘干，用不锈钢磨磨成粉，储于塑料瓶内，放一小包樟脑精，盖紧盖保存，备用。

4．1．2 蔬菜及其他植物性食物，取可食部用水冲洗3次后用纱布吸去水滴，用不锈钢刀切碎，取混合均匀的样品于60℃烘干，称重，粉碎，备用。

4．1．3 称取0．5～2．0g样品(含硒量0．01～0．5μg)于磨口三角瓶内，加10mL(5+95)去硒硫酸，样品湿润后，再加20mL混合酸液放置过夜。次日于沙浴上逐渐加热，当激烈反应发生后(溶液变无色)，继续加热至产生白烟，溶液逐渐变成淡黄色即达终点。某些蔬菜样品消化后常出现混浊，难以确定终点，所以要细心观察，还有含硒较高的蔬菜含有较多的Se⁶⁺，需要在消化达到终点时冷却后加10mL(1+9)盐酸，继续加热，使Se⁶⁺还原成Se⁴⁺。按上述方法确定终点。

4．2 测定 于样品消化液中加20mLEDTA混合液，用氨水(1+1)或盐酸调至淡红橙色(pH1，5～2．0)。以下步骤在暗室进行：加3mLDAN试剂，混匀，置沸水浴中煮5min，取出立即冷却，加3mL环己烷，振摇4min，将全部溶液移入分液漏斗，待分层后弃去水层，环己烷层转入带盖试管中，小心勿使环己烷中混入水滴，于激发光波长376nm，发射光波长520nm处测定苤硒脑的荧光强度。

4．3 硒标准曲线绘制 准确吸取硒标准使用液0．0，0．2mL，1．0mL，2．0mL及4．0mL，加水至5mL，按样品测定步骤同时进行。硒含量在0．5μg以下时荧光强度与硒含量呈线性关系，在常规测定样品时，每次需做试剂空白与样品含硒量相近的标准管(双份)即可。

5．分析结果的表述

式中 x——样品中硒含量，μg／g

A——标准管荧光读数

B——空白管荧光读数

c——样品管荧光读数

m₁——标准管硒含量，μg

m——试样质量，g

6．允许差

同一实验室平行测定或重复测定结果相对偏差绝对值≤10%。