RFLP检测技术

出处：按学科分类—农业科学 中国农业出版社《农作物品种鉴定手册》第62页（1757字）

由限制性内切酶酶解植物染色体DNA(或核DNA)可产生大量的限制性片段，通过琼脂凝胶电泳可将DNA片段按各自的长度分开，因为小片段泳动得快，大片段泳动得慢。一般对电泳的分辨范围在0．2－20kb(b=碱基对，kb=4碱基对)，因此在这个范围呈现的RFLP都是可以被检测的。但由于植物DNA的总长度可达10⁵－10⁹kb，在用限制性内切酶酶解后产生的片段数量很大，在电泳时彼此间虽然按长度分先后，但实际上却形成连续的一片，而无法辨认个别的限制性片段。为了显示某一序列的限制性片段，必须先将在凝胶上的所有DNA片段通过Southern吸印按其原来在凝胶上的位置转移到硝基纤维素膜或尼龙滤膜上，然后用探针进行分子杂交。所谓探针就是指与某片段的序列相同或相近的一段同源序列。探针上带有放射性同位素标记(或非同位素标记)，因此与探针杂交的限性片段所在的位置能通过放射自显影(或显色反应)显示出来，这样在比较不同的品种时，就能获得直观的RFLP。

【参考文献】：

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