棉籽、植株和土壤中残留量检测方法(方法二)
出处：按学科分类—农业科学 中国农业出版社《农药残留量实用检测方法手册第3卷》第54页（5654字）
山西省农业科学院植物保护研究所 乔雄梧 秦曙 朱九生 王静
样本中丁硫克百威和克百威用甲醇／磷酸缓冲液提取，3-羟基克百威用0．25mol／L盐酸溶液回流提取，二氯甲烷液-液分配，小型硅胶柱层析或凝胶过滤柱(棉籽)净化，气相色谱法(NPD)测定。
1．主要仪器及设备
气相色谱仪 氮磷检测器(NPD)
普通摇床
分散器
低压层析系统
固相萃取装置
2．主要试剂
甲醇、丙酮、二氯甲烷、乙酸乙酯、环己烷、石油醚、甲苯、氯化钠、无水硫酸钠、浓盐酸、十二烷基磺酸钠
磷酸缓冲液 pH8．0，称3．745g磷酸氢二钾和0．467g磷酸二氢钾，用水溶解并定容至1000mL
助滤剂 Celite545、活性炭(酸洗)
脱脂棉 用二氯甲烷索氏提取法抽提
凝胶过滤柱 将凝胶(Bio-BeadsS-X3，100～200目)在环己烷／乙酸乙酯(1∶1，V／V)中溶胀过夜，装入Φ15mm×600mm玻璃层析柱中备用
凝胶过滤用淋洗剂 环己烷／乙酸乙酯(1∶1，V／V)
层析硅胶G 10～40μm，在130℃下处理5h以上，1．5%水减活
小型硅胶柱 在内径10mm自制小型玻璃柱中，用10mL丙酮悬浮湿法装柱，依次装入1．0g脱活硅胶G、0．1g活性炭和1g无水硫酸钠，再用10mL石油醚预淋备用。
淋洗剂1#，石油醚
淋洗剂2#，石油醚／甲苯(65∶35，V／V)
淋洗剂3#，甲苯
淋洗剂4#，甲苯／丙酮(95∶5，V／V)
淋洗剂5#，甲苯／丙酮(80∶20，V／V)
丁硫克百威标准品、克百威标准品、3-羟基克百威标准品
3．检测步骤
3．1 土壤中丁硫克百威和克百威的提取和净化
3．1．1 提取
称取20．0g土样于250mL具塞三角瓶中，加入100mL甲醇／磷酸盐缓冲液(9∶1，V／V)，在摇床上以250r／min提取1h，用布氏漏斗抽滤。
3．1．2 净化
将滤液转入到500mL分液漏斗中，加入15g氯化钠和100mL蒸馏水，用50mL×3二氯甲烷萃取，合并二氯甲烷相，经装有5cm无水硫酸钠层的漏斗过滤到250mL圆底烧瓶中，加两滴乙二醇，用旋转蒸发器(35℃)浓缩至近干，用环己烷／乙酸乙酯(1∶1，V／V)转入10mL刻度试管中并定容至4．0mL。
取1．0mL加到小型硅胶柱上，用8mL淋洗剂4#洗脱，收集全部洗脱液至K-D浓缩器中，用高纯氮气浓缩至1．0mL，待测。
3．2 棉叶中丁硫克百威和克百威的提取和净化
3．2．1 提取
称取20．0g切碎的棉叶，用100mL甲醇／磷酸盐缓冲液(9∶1，V／V)匀浆2min，在布氏漏斗中加1g助滤剂，抽滤。
3．2．2 净化
将滤液转入500mL分液漏斗中，加15g氯化钠和100mL水，用50mL×3二氯甲烷萃取，合并二氯甲烷相，经装有3cm无水硫酸钠层的漏斗过滤到250mL圆底烧瓶中，加两滴乙二醇，用旋转蒸发器(35℃)浓缩至近干，用环己烷／乙酸乙酯(1∶1，V／V)转入10mL刻度试管中并定容至4．0mL。
取1．0mL，在低压层析系统上过凝胶柱净化，用环己烷／乙酸乙酯(1∶1，V／V)以2mL／min的速率淋洗。弃去前45mL，收集后25mL并浓缩至约1mL，转移到小型硅胶柱上。用2mL石油醚漂洗容器并加到柱上，再用6mL石油醚淋洗柱子。用2mL淋洗剂2#漂洗容器，并加到柱上，再用6mL淋洗剂2#淋洗。用2mL淋洗剂3#漂洗容器，并加到柱上，再用6mL淋洗剂3#淋洗。均弃去。用2mL淋洗剂4#漂洗容器，并加到柱上，再用6mL淋洗剂4#洗脱，收集此洗脱液到K-D瓶中，浓缩至所需体积，待测。
3．3 棉籽中丁硫克百威和克百威的提取和净化
3．3．1 提取
称取10．0g棉籽样本粉碎混匀，加100mL甲醇／磷酸盐缓冲液(9∶1，V／V)，匀浆2min。在布氏漏斗中加1g助滤剂，抽滤，滤渣再用75mL甲醇-磷酸盐缓冲液(9∶1，V／V)匀浆2min，抽滤。
3．3．2 净化
合并滤液于500mL分液漏斗中，加入25g氯化钠和80mL蒸馏水，用50mL×3二氯甲烷萃取，每次2min。合并二氯甲烷相，经装有3cm无水硫酸钠层的漏斗过滤到250mL圆底烧瓶中，加两滴乙二醇，用旋转蒸发器(35℃)浓缩至近干。用环己烷／乙酸乙酯(1∶1，V／V)转入10mL刻度试管中并定容至4．0mL。
取2．0mL在低压层析系统上过凝胶柱净化，用环己烷／乙酸乙酯(1∶1，V／V)以2mL／min的速率淋洗。弃去前55mL，收集随后的25mL。将该组分浓缩至约1mL，转移到小型硅胶柱上。以下淋洗操作同棉叶。
3．4 土壤中3-羟基克百威的提取和净化
3．4．1 提取
称取20g土样，加100mL0．25mol／L盐酸溶液，回流1h。在布氏漏斗中加1g助滤剂，抽滤。
3．4．2 净化
将滤液转入500mL分液漏斗中，加入15g氯化钠，用50mL×3二氯甲烷萃取，合并二氯甲烷相，经装有5cm无水硫酸钠层的漏斗过滤到250mL圆底烧瓶中，用旋转蒸发器(35℃)浓缩至近干，用环己烷／乙酸乙酯(1∶1，V／V)转入10mL刻度试管中并定容至4．0mL。
取1．0mL加到小型硅胶柱上，用8mL淋洗剂4#淋洗，弃去，再用8mL淋洗剂5#洗脱，洗脱液收集到K-D瓶中，浓缩至1mL，待测。
3．5 棉叶中3-羟基克百威的提取和净化
3．5．1 提取
称取20g切碎的棉叶，加0．25mol／L盐酸200mL，回流1h，在布氏漏斗中加1g助滤剂，抽滤。滤液转入500mL分液漏斗中，加30g氯化钠和0．5mL4%十二烷基磺酸钠水溶液，用50mL×3二氯甲烷萃取，合并二氯甲烷相，经装有5cm无水硫酸钠层的漏斗过滤到250mL圆底烧瓶中，用旋转蒸发器(35℃)浓缩至近干，用环己烷／乙酸乙酯(1∶1，V／V)转入10mL刻度试管中并定容至4．0mL。
3．5．2 净化
取1．0mL加到小型硅胶柱(不含活性炭)上，用10mL淋洗剂4#淋洗，弃去，用10mL淋洗剂5#洗脱，收集洗脱液于K-D瓶中，浓缩至所需体积，待测。
3．6 棉籽中3-羟基克百威的提取和净化
3．6．1 提取
取10．0g棉籽粉碎，置于250mL三角瓶中，加0．25mol／L盐酸溶液150mL，回流1h，冷却后，用加有1g助滤剂的布氏漏斗抽滤，用30mL0．25mol／L盐酸溶液冲洗容器与滤渣。
3．6．2 净化
合并滤液于500mL分液漏斗中，加入25g氯化钠、10mL4%十二烷基磺酸钠(若仍有乳化现象，适当增加用量)，用50mL×3二氯甲烷萃取，合并二氯甲烷相，经装有5cm无水硫酸钠层的漏斗过滤到250mL圆底烧瓶中，用旋转蒸发器(35℃)浓缩至近干，用环己烷／乙酸乙酯(1∶1，V／V)转入10mL刻度试管中并定容至4．0mL。
取2．0mL过凝胶层析柱，用环己烷／乙酸乙酯(1∶1，V／V)以2mL／min的速率淋洗。弃去前60mL，收集后20mL，在K-D浓缩器中浓缩至1．0mL。转移至小型硅胶柱(不含活性炭)中，用4mL淋洗剂4#漂洗容器，并加到柱上，再用6mL淋洗剂4#淋洗，弃去。用4mL淋洗剂5#漂洗容器，并加到柱上，开始收集洗脱液，再用6mL淋洗剂5#漂洗容器，并加到柱上。将洗脱液收集在K-D瓶中，浓缩至所需体积，待测。
3．7 气相色谱法测定
检测器 NPD
色谱柱 HP-5，15m×0．53mm×1．5μm
检测温度 柱温170℃，3．5min，35℃／min，240℃，8．5min；进样口200℃；检测器250℃(丁硫克百威)
柱温170℃，3．5min，35℃／min，240℃，8．5min；进样口200℃；检测器250℃(克百威)
柱温180℃，10℃／min，240℃，2min；进样口200℃；检测器250℃(3-羟基克百威)
载气 高纯氮40kpa，尾吹气275kpa
燃烧气 空气250kpa，氢气120kpa
进样量 2μL
分流比 1∶2
保留时间 丁硫克百威7．73min，克百威3．07min，3-羟基克百威3．17min
4．结果计算
外标(峰面积)-标准曲线法定量
5．灵敏度、准确度和精确度
最小检出量 丁硫克百威8×10－11g，克百威1×10－10g，3-羟基克百威4×10－10g。
最低检测浓度 在棉籽、棉叶和土壤中丁硫克百威为0．02mg／kg，克百威为0．02mg／kg，3-羟基克百威为0．02mg／kg。
回收率 土壤、棉叶和棉籽中添加丁硫克百威、克百威和3-羟基克百威0．05～0．50mg／kg时，平均回收率分别为73．1%～108．7%，85．5%～122．8%，73．0%～94．9%。见表1-6-9。
相对标准偏差 1．0%～21．3%，见表1-6-9。
表1-6-9 土壤、棉叶和棉籽中丁硫克百威、克百威和3-羟基克百威添加回收率及相对标准偏差实验结果
6．棉籽和土壤中丁硫克百威及其代谢物气相色谱测定谱图
见图1-6-4。
图1-6-4 棉籽和土壤中丁硫克百威及其代谢物气相色谱测定谱图