棉籽和土壤中残留量检测方法

出处：按学科分类—农业科学 中国农业出版社《农药残留量实用检测方法手册第3卷》第525页（2972字）

中国科学院上海昆虫研究所 徐乃旭 陈问达

棉籽经2N硫酸回流提取后，在碱性条件下，用四氢硼钠衍生，乙醚萃取，气相色谱法(NPD)测定。土壤用12N硫酸回流提取，经阳离子交换树脂净化、连二亚硫酸钠的氢氧化钠溶液反应后，用紫外分光光度计定量测定。

1．主要仪器及设备

气相色谱仪 氮磷检测器(NPD)

紫外光栅分光光度计

酸式滴定管 25毫升

2．主要试剂

无水乙醚(重蒸)、2-辛醇、硫酸、氯化铵、四氢硼钠、连二亚硫酸钠

强酸性阳离子交换树脂 用去离子水冲洗洁净后，保存于去离子水中备用

0．2%连二亚硫酸钠的氢氧化钠溶液 称取100mg连二亚硫酸钠溶解于50mL0．3mol／L氢氧化钠水溶液中。此溶液很不稳定，现用现配，有效期为30min。

百草枯标准品

3．检测步骤

3．1 棉籽

3．1．1 提取

称取10g剪碎的棉籽样本，加入100mL2N硫酸和1mL2-辛醇，在95℃水浴中回流4h。冷却至室温，用20mL蒸馏水冲洗冷凝管内壁。溶液经布氏漏斗过滤，并用100mL蒸馏水分数次洗涤残渣后过滤。合并滤液于平底烧瓶中。

3．1．2 衍生化反应

用5mol／L氢氧化钠溶液将棉籽提取液调节呈碱性，于40℃水浴中两次加入0．5～0．8g四氢硼钠进行加氢反应，间隔为1h，期间摇荡容器数次。

3．1．3 液-液分配净化

将加氢反应后的溶液用20mL、20mL、10mL乙醚萃取。合并乙醚相，经无水硫酸钠干燥后，收集于50mL容量瓶中。浓缩后待测。

3．1．4 气相色谱法测定

检测器 NPD

色谱柱 Φ3．2mm×2．1m玻璃柱，5%Apiezon L+5%KOH／GCS880 AW DMCS，60～80目

检测温度 柱温230℃；进样口260℃；检测器260℃

载气 高纯氮，40mL／min

燃烧气 氢气5mL／min，空气150mL／min

保留时间 4～5min(加氢衍生物)

3．2 土壤

3．2．1 提取

称取50g土壤样本，加入100mL12N硫酸和1mL2-辛醇，加热至沸回流5h。冷却至室温，用100mL蒸馏水冲洗冷凝管内壁，溶液经布氏漏斗过滤，用200～300mL蒸馏水分数次洗涤残渣后过滤。合并滤液(滤液中不得有微细固体颗粒)，并用蒸馏水稀释至1000mL。

3．2．2 柱净化

将5g浸于去离子水中的阳离子树脂装入25mL酸式滴定管中，制成层析柱。依次用25mL饱和氯化钠和50mL去离子水预洗，控制流速约为5mL／min。将1000mL土壤样本提取溶液以5～10mL／min的流速通过层析柱。以相似的流速依次用25mL去离子水、50mL2mol／L盐酸、25mL去离子水、100mL2．5%氯化铵和25mL去离子水淋洗层析柱，弃去。用50mL饱和氯化铵溶液以约1mL／min的流速洗脱并收集于50mL容量瓶中，用饱和氯化铵溶液定容后，保存于黑暗处，待测。

3．2．3 紫外分光光度法测定

显色溶液 0．2%连二亚硫酸钠碱性溶液

参比溶液 10mL饱和氯化铵溶液中加入2mL0．2%连二亚硫酸钠溶液

吸收波长 392nm，396nm和400nm

测定步骤 取10mL待测液于试管中，加入2mL0．2%连二亚硫酸钠碱性溶液，塞上试管塞，轻轻地颠倒试管3次，使溶液混匀。以参比溶液为参照，测定样本溶液在392nm、396nm和400nm处的吸光度A。用公式计算出该样本的△A。

4．结果计算

4．1 气相色谱法

外标(峰面积)-标准曲线法定量

4．2 分光光度法

吸光度差(△A)-标准曲线法定量

△A=2A₃₉₆－A₃₉₂-A₄₀₀

5．灵敏度、准确度和精确度

最小检出量 棉籽1．6×10^－11g，土壤1×10^－6g。

最低检测浓度 棉籽0．01mg／kg，土壤0．1mg／kg。

回收率 棉籽中添加百草枯0．05～2．0mg／kg时，平均回收率为88．5%～93．9%，土壤中添加百草枯0．5～5．0mg／kg时，平均回收率为74．9%～84．8%。见表3-27-1。

相对标准偏差 3．2%～21．1%，见表3-27-1。

表3-27-1 棉籽和土壤中百草枯添加回收率及相对标准偏差实验结果

6．棉籽中百草枯加氢衍生物气相色谱测定谱图

见图3-27-1。

图3-27-1 棉籽中百草枯加氢衍生物气相色谱测定谱图