克莱格(Clegg)蒽酮法测定总糖

出处：按学科分类—医药、卫生 中国科学技术出版社《食物营养分析实用手册》第68页（1471字）

此法用高氯酸消化饲料或食品，用蒽酮法比色测定可溶性糖类和水解淀粉，可应用于各种饲料原料和食品原料。

试剂

(1)高氯酸(52%)：于100毫升水中加270毫升高氯酸(比重1．70)，使用前冷却；

(2)硫酸：于330毫升水中小心加760毫升硫酸(比重1．84)。使用前冷却；

(3)蒽酮试剂：用上述硫酸配制足够的供当日用的0．1%蒽酮。临用前配制；

(4)葡萄糖标准液：称100毫克葡萄糖溶解后定容于100毫升容量瓶中；

(5)葡萄糖稀标准液：将10毫升上述浓标准液用水稀释至100毫升。此液1毫升相当于0．1毫克葡萄糖。

操作步骤

1．提取

(1)准确称取1．0克干试样或2．5克湿试样(约含60～300毫克总糖)。置100毫升带塞量筒内。加入10毫升水，用玻璃棒搅拌均匀。

(2)加入13毫升52%高氯酸溶液。用玻璃棒搅拌20分钟以上。用水冲洗玻璃棒，并用蒸馏水稀释至100毫升，混匀。

(3)过滤：将以上提取液过滤到250毫升容量瓶内。用蒸馏水冲洗量筒并过滤于容量瓶内，定容至刻度，混匀。

2．测定

(1)取10毫升上述提取液，用水稀释至100毫升。

(2)吸取1毫升稀释的提取液于试管内。

(3)取1毫升水于试管内作空白。

(4)取1毫升葡萄糖稀释标准液。

(5)于以上各试管内迅速加进5毫升蒽酮试剂。塞紧试管，混匀，置沸水浴中准确作用12分钟。并迅速冷却至室温(可流水冷却或冰箱内冷却)。

(6)在721型分光光度计上，波长630nm，以空白调零。测定试样和标准液的光密度值。

3．计算：

式中：样品OD₆₃₀：样品提取液的光密度值；

标准OD₆₃₀：葡萄糖稀标准液的光密度值；

0．1：1毫升稀标准液相当于0．1毫克葡萄糖；

1000：样品克换算为毫克；

100：换算为百分含量；

W：样品称重(克)；

250×10：样品提取液稀释后的毫升数。