游离棉籽酚的测定

出处：按学科分类—医药、卫生 中国科学技术出版社《食物营养分析实用手册》第233页（2396字）

棉籽酚(棉酚)是棉籽腺中存在的一种内源毒素(无腺棉籽的品种除外)，如不除去对动物的生长繁殖均不利。

此测定方法适用于棉籽、棉籽饼等样品。

试剂

(1)丙酮，(分析纯)。

(2)异丙醇(分析纯)。

(3)环己烷(光谱纯)。

(4)含水丙酮：7份丙酮，3份蒸馏水(V／V)。

(5)含水异丙醇：8份异丙醇，2份蒸馏水(V／V)。

(6)硫脲溶液：称取10克硫脲(分析纯)，溶于蒸馏水中，并稀释至100毫升。

(7)1．2N盐酸溶液：吸取53毫升浓盐酸于500毫升容量瓶中，并定容至刻度。

(8)苯胺：在苯胺中加入少许锌粉后，进行蒸馏，弃去馏出物开始和最后的10%左右，放在塞好的棕色瓶内，冰箱保存，可保存数月。

(9)棉籽酚标准溶液

①棉籽酚标准贮备液：称取25毫克纯棉籽酚，置于250毫升容量瓶中，加入100毫升丙酮，1．0毫升冰醋酸，75毫升蒸馏水，用丙酮稀释至刻度。

②棉籽酚标准工作液：吸取50毫升上述标准贮备液，置于250毫升容量瓶中，加入125毫升丙酮，用蒸馏水稀释至刻度。此液每毫升含棉籽酚0．02毫克。避光保存，可稳定24小时。

操作步骤

1．样品的制备：称取0．5～1．0克样品，置于锥形烧瓶中，加入50毫升含水丙酮溶液，塞好塞子，振荡1小时，过滤，弃去开始的数毫升滤液，其余滤液备用。

2．测定：取三支25毫升的带塞刻度试管，分别标以甲管，乙管和丙管。

(1)甲管中加入样品滤液2～10毫升(视棉籽酚的含量而定)。加2滴10%硫脲水溶液，1滴1．2N盐酸溶液，用含水异丙醇溶液稀释至刻度。以含水异丙醇水溶液为空白，在721型分光光度计上于440nm波长处测定其光密度。

(2)乙管中加入样品滤液2～10毫升(与甲管同)。再加入2滴10%硫脲水溶液，1滴1．2N盐酸溶液及2毫升重蒸馏的苯胺。

(3)丙管(空白对照管)：加入与样品滤液等量的含水丙酮溶液，2滴10%硫脲溶液(不加1．2N盐酸)及2毫升苯胺。

(4)将乙、丙二管置沸水浴中加热30分钟。取出，两管均加入10m1含水异丙醇溶液，流水冷却至室温，再用含水异丙醇溶液稀释至刻度。

(5)以丙管为空白调零，在721型分光光度计上于440nm波长处测定乙管的光密度。

3．标准曲线的绘制

(1)甲组：吸取0．0，1．0，2．0，3．0，4．0，5．0，7．0，10．0毫升标准棉酚工作液，分别置于8个25毫升具塞试管中，各加入2滴10%硫脲水溶液，1滴1．2N盐酸，并用异丙醇水溶液稀释至刻度，混匀，在721型分光光度计上于440nm波长处测定各管光密度(以含水异丙醇溶液为空白)。

(2)乙组：将8个具塞刻度试管中移入与甲组相同的标准棉酚溶液。然后各管分别加入2滴10%硫脲水溶液。1滴1．2N盐酸和2毫升重蒸馏的苯胺。

(3)空白：取一25毫升刻度试管，移入10毫升含水丙酮溶液，2滴10%硫脲水溶液和2m1苯胺(不加1．2N盐酸)。

(4)将乙组试管及空白试管(即②和③)，置沸水浴中加热30分钟，取出，冷却至室温，用含水异丙醇溶液稀释至刻度。

以空白管调零，在721型分光光度计上于440nm波长处测定其光密度。

(5)每一标准棉酚的校正光密度值=(乙组光密度－甲组光密度)。以校正光密度为纵坐标，相应棉酚毫克数为横坐标，绘制标准曲线。

4．计算：

样品液校正光密度=(样品乙管光密度－样品甲管光密度)，查标准曲线得样品待测液中棉酚含量(毫克)。

式中：A：查标准曲线待测样品液中棉酚含量(毫克)；

V；供比色所取滤液体积(毫升)；

50：样品液总体积(毫升)；

W：样品称重(克)，

100：换算为百分含量。