培养基的制备及应用
出处：按学科分类—农业科学 中国农业出版社《鸡病诊断技术手册》第81页（10314字）
(1)肉汤培养基 有商品培养基出售，按使用说明配制。
【用途】肉汤的基础培养基，可做其它固体，鉴别及特殊培养基的原料，除少数病原菌外，一般细菌均可在此培养基内生长。
(2)营养琼脂培养基 有商品培养基出售，按使用说明配制。
【用途】一般细菌的分离培养、保存菌种等，也可以作特殊培养基的基础。
(3)半固体培养基 有商品培养基出售也可自配。
【成分】肉汤培养基100毫升，琼脂0．3－0．6克。
【制法】将上述两种成分混合，加热溶解，矫正pH为7．6，再加热半小时，过滤，分装于试管或三角瓶，15磅压力下灭菌30分钟，备用。
(4)血液琼脂培养基
【成分】营养琼脂100毫升，脱纤绵羊血液5－10毫升。
【制法】取营养琼脂100毫升，加热溶解，待冷至50℃，以无菌操作加脱纤血液10毫升，轻轻摇匀倾注于无菌平皿中，制成血液平板或分装于试管内制成血液斜面，经无菌检查后，即可使用，或保存于冰箱内备用。
【用途】血液琼脂对很多细菌的生长有促进作用，可用于营养要求较高的细菌的培养，如巴氏杆菌等。此外，还可以观察细菌的溶血现象。
(5)血清琼脂培养基
【成分】灭菌普通琼脂100毫升，无菌血清(马、牛或羊)10毫升。
【制法】取已制备好营养琼脂加热溶解，待冷至50℃，加入无菌血清，混匀，倾入灭菌的平皿或试管，试管需放成斜面，凝固后放入温箱培养24小时，无菌生长者即可使用。
【用途】用于营养要求较高的细菌的培养，如巴氏杆菌菌落性状检查。
(6)巧克力琼脂培养基
【成分】普通琼脂100毫升，无菌脱纤新鲜血液10毫升。
【制法】取已制备好的普通琼脂，溶化，待冷却到55℃左右，以无菌操作加入脱纤血液，混匀后，逐渐加温到85℃，使红血球破坏，培养基变成巧克力色(暗褐色)，制成斜面或平板凝固后放置37℃温箱中，无菌检查后，放入冰箱备用。
【用途】可用于嗜血杆菌属及鸭疫巴氏杆菌的培养。
(7)四硫磺酸盐肉汤
【基础液】多价胨或
胨5克，胆盐1克，碳酸钙10克，硫代硫酸钠30克，水1000毫升。
【碘液】碘6克，碘化钾5克，水20毫升。
【制法】将基础液混合加热溶解，分装试管，每管10毫升，分装时注意振荡，使碳酸钙均匀地分装在试管内。在15磅压力下压菌20分钟。临用前每管加碘液0．2毫升。
【用途】沙门氏菌增菌培养用。
(8)氯化镁孔雀绿培养基(MM肉汤)
【甲液】胰蛋白胨5克，氯化钠8克，KH2PO41．6克，水1000毫升。
【乙液】氯化镁40克，水100毫升。
【丙液】0．4%孔雀绿水溶液。
【制法】分别按上述成分配好后。15磅压力下灭菌20分钟，备用。用时以无菌操作取甲液100毫升加乙液20毫升，丙液3毫升混合后，分装试管。每管5毫升。
【用途】沙门氏菌增菌用。
注：沙门氏菌增菌效果可用下述方法检查。先培养大肠菌和沙门氏菌24小时肉汤培养物二管备用。取一环沙门氏菌接种在5毫升肉汤中。混合后，取一环接种在第2管肉汤中，并各加0．1毫升大肠菌培养物，置37℃培养过夜。各取一环在麦康琼脂上分离培养，如果效果良好，应均有沙门氏菌落出现。
(9)煌绿增菌培养基
【成分】含0．5%氯化钠和1%蛋白胨液(pH为7．0灭菌待用)1∶10000煌绿水溶液(先配成1%水溶液，灭菌待用，应用时可取出0．1毫升加入9．9毫升灭菌蒸馏水即可)。
【制法】取灭菌试管三支，以灭菌吸管吸取1%蛋白胨液加入各管中，每管10毫升，再分别加入不同量(0．25毫升，0．4毫升及0．7毫升)的1∶10000煌绿水溶液。
【用途】分离肠道中的沙门氏杆菌用。
注：
①将粪便用灭菌生理盐水做成浓悬液(如为液状粪便或保存在缓冲液中的粪便不需再做悬液)取2－3铂身(接种环)粪便悬液接种在上述各管中，在37℃温箱内培养12－18小时后，即接种于选择培养基如伊红美兰琼脂平板上。
②在煌绿培养基中沙门氏菌生长较大肠菌快，有时可获得前者的纯培养。
③这种培养基主要依靠适当浓度的煌绿对大肠杆菌有选择性的抑制作用。上述量一般对大肠杆菌的生长有抑制作用。亦能抑制志贺氏菌；对沙门氏菌的生长则无影响，但偶尔有对煌绿有抵抗力的个别的大肠杆菌生长。
(10)亚硒酸盐(S．F)增菌液
【成分】蛋白胨5克，磷酸氢二钠4．5克，磷酸二氢钠5．5克，乳糖4克，亚硒酸钠4克，蒸馏水1000毫升。
【制法】
①将亚硒酸钠溶于约200毫升水中(不可加热)；
②再将其他成分混合于约800毫升水中，加热溶解；
③然后将上述两液混合。充分摇匀，校正pH至7．1分装试管，每管约10毫升。
④用流通蒸气100℃15－20分钟灭菌后备用。
【用途】用于粪便沙门氏菌的增菌培养。
注：
①本培养基不适宜用高压灭菌，温度过高，会有大量红色沉淀形成，影响增菌效果。
②pH值必须为7．1，否则会生成棕色沉淀，若pH不符合，可改变磷酸氢二钠和磷酸二氢钠的比例。进行调整。
③亚硒酸钠或亚硒酸氢钠同样可用。
④在增菌培养时粪便按1∶10来加，或棉球棒标本插入增菌液内，充分混匀，于37℃培养，不超过24小时即接种于选择培养基如SS平板等。
⑤此培养基贮存时间不宜超过二周。
(11)麦康凯琼脂
【成分】蛋白胨20克，氯化钠5克，乳糖10克，胆盐5克，琼脂20－25克，蒸馏水1000毫升，1%中性红水溶液5毫升。
【制法】
①蛋白胨、氯化钠、胆盐及乳糖加于500毫升水中加热溶解。
②将琼脂加入余下的500毫升水中，加热溶解。
③将上述二液趁热混合。调整pH至7．4，以纱布棉花过滤，按每瓶100毫升分装，10磅灭菌20分钟。
④待冷至50－60℃时。每100毫升培养基中加入经煮沸灭菌的1%中性红水溶液0．5毫升，混合后倾注平板。
【用途】供分离肠道杆菌用。
注：胆盐(或牛胆酸钠4克与去氧胆酸钠1克)能抑制部分非病原菌及革兰氏阳性细菌生长，但能促进某些革兰氏阴性病原菌的生长。因含乳糖及中性红指示剂，故分解乳糖的细菌(如大肠杆菌)菌落呈红色；不分解乳糖的细菌，菌落不呈红色。
此培养基有商品培养基出售，可按使用说明配制。
(12)中国蓝琼脂
【成分】肉膏汤琼脂(营养琼脂pH7．4100毫升，乳糖1克，1%中国蓝水溶液，灭菌)0．5－1毫升，1%玫瑰红酸乙醇溶液1毫升。
【制法】
①将乳糖1克置于已灭菌的琼脂瓶内，加热融化并混匀。
②待冷至50℃左右，加入中国蓝、玫瑰红酸溶液混匀，立即倾注平板，凝固后备用。
【用途】分离肠道致病菌用。
注：
①中国蓝是指示剂，在酸性时呈蓝色，碱性时微蓝至无色反应。
②玫瑰红酸是指示剂，在酸性时呈黄色，碱性时呈红色反应。
③培养基pH约7．4，制好后应呈淡紫红色，过碱呈鲜红色，过酸呈蓝色，均不适用。
④玫瑰红酸能抑制革兰氏阳性菌生长，对大肠杆菌没有抑制作用，故粪便标本接种量不宜太多。
⑤多数肠道致病菌不分解乳糖，其菌落为透明半透明、淡红色；大肠杆菌分解乳糖产酸，形成大而浑浊的蓝色菌落，在培养基中加指示剂时中国蓝水溶液需灭菌10磅15分钟后应用，玫瑰红酸是乙醇溶液，无需灭菌。玫瑰红酸见光容易变质，应保存暗处。
(13)沙门氏菌志贺氏菌琼脂(简称SS琼脂)
【成分】
胨5克，硫代硫酸钠8．5克，牛肉膏5克，琼脂20－25克，乳糖10克，1%中性红水溶液2．5毫升，三号胆盐8．5克，0．1%煌绿溶液0．33毫升，枸橼酸钠8．5克，蒸馏水1000毫升，枸橼酸铁0．5克。
【制法】
①除中性红和煌绿外，其余成分混合，加热熔解。
②调整pH值至7．1，再加入中性红和煌绿溶液，充分混匀，再煮沸一次，待冷至55℃左右即可倾注平板，置暗冷处
备用。
此培养基不能高压蒸气灭菌或加热过久，制成的平板宜当日用完，最迟不超过2－3天。用前应将琼脂表面水分烘干。煌绿溶液备制后限10日内用完。国内有SS干燥粉供应。
【用途】沙门氏菌属和志贺氏菌属均能生长，并保持在SS琼脂上应有特性。对大肠杆菌有一定抑制能力。生长的大肠杆菌呈桃红色。
(14)去氧胆酸盐枸橼酸盐琼脂(DC琼脂)
【成分】蛋白胨10克，氯化钠5克，乳糖10克，琼脂20－25克，无水磷酸氢二钾2克，1%中性红水溶液3毫升，枸橼酸铁1克，蒸馏水1000毫升，枸橼酸钠1克，去氧胆酸钠1克。
【制法】
①除琼脂外，其余各成分加热溶于水，待溶解后加入琼脂浸泡10分钟。
②微温加热并不时摇匀，煮沸1分钟。切忌过热，否则会增加抑制性。校正pH值至7．2。
③倾注平板备用，临用前将表面水分烘干。
【用途】分离肠道致病菌用。
(15)伊红美蓝琼脂
【成分】肉膏汤琼脂(pH7．4)100毫升，乳糖1克，2%伊红水溶液(灭菌)2毫升，0．5%美兰水溶液(灭菌)1毫升。
【制法】先将琼脂乳糖混合，加热熔解，待冷至60℃左右时加入美兰和伊红溶液，混匀倾注平板，凝固后备用。
【用途】分离肠道致病菌用。
注：伊红和美蓝在培养基中起指示剂作用，如大肠杆菌分解乳糖产酸使pH值降低。致使伊红和美蓝相结合成紫黑色或紫红色化合物。故菌落呈紫黑色或紫红色，且有金属光泽。在碱性环境中，伊红、美蓝不能结合，故不分解乳糖的细菌菌落为无色。
伊红与美蓝溶液有抑制革兰氏阳性菌生长作用，但粪链球菌仍能生长，伊红与美蓝溶液须10磅灭菌15分钟后备用。
(16)三糖铁琼脂(TSI琼脂)
【成分】肉膏3克，酵母膏3克，蛋白胨15克，胰胨5克，乳糖10克，蔗糖10克，葡萄糖1克，硫酸亚铁0．2克，氯化钠5克，硫代硫酸钠0．3克，琼脂12克，0．4%酚红水溶液6毫升，水1000毫升。
【制法】将上述成分混合，加热溶解，校正pH为7．3，分装试管5－7毫升。10磅压力下灭菌20分钟，趁热制成使底层成柱状，上层成斜面，凝固后使用。
【用途】用于初步筛选肠道菌。底层穿刺，斜面涂抹接种。只底部产酸表示葡萄糖发酵，斜面和柱层产酸表示乳糖或蔗糖发酵，穿刺线变黑表示有H2S产生。
(17)此培养基有成品粉剂出售
劳文斯坦——钱森二氏培养基
【成分】天门冬素3．6克，K2HPO42．4克，柠檬酸镁0．6克，马铃薯淀粉30克，甘油12毫升，2%孔雀绿水溶液20毫升，全蛋1000毫升，蒸馏水600毫升，MgSO4·7H2O0．24克。
【制法】
①全蛋、马铃薯淀粉和孔雀绿以外的各种成分混合并加热溶于水。
②冷却后加入马铃薯淀粉边加边拌成稀糊状，再隔水煮沸1小时。
③用清水将蛋壳上的污物洗去，浸泡于70%酒精内15－20分钟，取出后以无菌手续打破蛋壳将全蛋置于灭菌的含玻璃珠的三角烧瓶内，用力摇震，使之打成均匀的全蛋液，以无菌纱布过滤至无菌瓶内。
④待马铃薯淀粉和盐类溶液冷至56℃时，以无菌操作加入全蛋液和灭菌的2%孔雀绿水溶液，混匀，分装灭菌试管。
⑤将分装后试管放在蒸煮器或血清凝固器内摆成斜面，加热至85℃左右，经1－2小时后让培养基完全凝固，次日和第三天分别用80℃各灭菌1小时。
⑥以无菌手续将棉塞换成无菌的橡皮塞或浸有固体溶化石蜡的软木塞，37℃培养2天，无菌生长者可贮存备用。
【用途】用于结核杆菌的分离与培养。
(18)禽支原体培养基
①牛心浸液制备：取去脂绞碎牛心500克，加入1000毫升水，4℃浸泡过夜，次日煮沸0．5小时，过滤去渣，滤液用水补充至原量。
②完全培养基配制：每升牛心浸液中加入蛋白胨10克，NaC15克，酶母浸液10毫升，葡萄糖5克，加热溶解后，校正pH值至7．8，过滤(如需制固体培养基，此时将琼脂加入滤液使成1%－1．5%浓度)，121℃高压灭菌15分钟，待冷至50℃左右时，加入无菌灭能马血清达20%，青霉素和灭菌醋酸铊溶液使之含量分别达200国际单位／毫升和0．025克，无菌分装试管(或倾注平板)。
【用途】培养支原体用。
(19)高盐甘露醇琼脂
【成分】蛋白胨10克，牛肉膏1克，琼脂20克，氯化钠75克，甘露酵10克，蒸馏水1000毫升，0．4%酚红溶液6毫升。
【制法】将蛋白胨、牛肉膏、氯化钠、琼脂及水混合后加热溶解，校正pH至7．4，以纱布过滤，趁势加入甘露酵及酚红溶液，充分混匀，分装于三角瓶内，10磅灭菌15分钟，倾注平板，凝固后冷藏备用。
【用途】分离致病性葡萄球菌。葡萄球菌能在含大量盐分的培养基中生长，并可分解甘露醇使培养基呈橙黄色。
(20)Cetrim ide 琼脂
【成分】蛋白胨20克，琼脂干粉13．6克，氯化镁1．4克，蒸馏水1000毫升，硫酸钾10克，甘油10毫升，溴化十六烷基二甲胺(Cetrimide)0．3克。
【制法】将甘油以外的各成分混于水，加入甘油10毫升，加热并不时搅拌，再煮沸1小时，矫正pH值至7．4左右(最终pH值应为7．2左右)。分装灭菌大试管，每管5－6毫升，118－121℃灭菌15分钟，置成很大斜面，凝固后即用或冷藏备用。
绿脓杆菌和荧光假单胞菌因不被Cetrimide抑制，仍能生长外，其余各种假单胞菌及有关的非发酵型细菌均被抑制生长，故本培养基可作绿脓杆菌的选择性分离和鉴定。
(21)沙氏培养基
【成分】蛋白胨2克，蔗糖(麦芽糖)4克，琼脂1．5克，蒸馏水100毫升。
【制法】将上述成分混合，加热溶解，校正pH值至5．5，再加热10分钟，分装于瓶内或试管内，10磅灭菌20分钟即可备用。
【用途】主要用于真菌的分离培养，若用于污染病料的真菌分离培养，可在上述培养基灭菌前加入氯霉素，使其最终浓度达0．05毫克／毫升，混匀后再灭菌。
(22)察氏培养基
【成分】蔗糖30克，氯化钾0．5克，硫酸亚铁0．01克，硝酸钠3克，琼脂20克，磷酸氢二钾1克，蒸馏水1000毫升。
【制法】将各物混合，加热融解，调整pH值至5．5－6．0，分装试管或三角瓶，115℃高压蒸气灭菌15－20分钟，置成斜面或浇成平板。此培养基比沙堡弱氏琼脂营养高，真菌生长较好，孢子形态与色泽也较鲜明。如需加入氯霉素方法同上。
【用途】用于真菌的分离培养。
(23)真菌选择性琼脂(Mycosel Agar)
【成分】大豆胨10克，葡萄糖10克，琼脂15－20克，氯霉素0．05克，放线菌酮0．4克，蒸馏水1000毫升。
【制法】将上述各成分混于水中，加热融解，校正pH值至6．9，分装后118℃高压灭菌10分钟，倾注平板即可使用。
(24)马铃薯葡萄糖琼脂
【成分】马铃薯(去皮切碎)200－300克，葡萄糖5克，琼脂20克，蒸馏水1000毫升。
【制法】马铃薯去皮切碎，加入水中，煮沸40分钟，挤压取其汁，用纱布过滤，加水补足至原量，加入葡萄糖和琼脂，加热融化后，校正pH值至5．6，分装试管或烧瓶，121℃高压灭菌15分钟。此培养基多用于霉菌或酵母菌的玻片培养法菌落的显微镜检查。接种后应于室温培养，并检查生长物的孢子形成。
(25)硫乙醇钠培养基
【成分】多价蛋白胨15克，葡萄糖6克，NaCl2．5克，L胱氨酸(L-cystlne)0．25克，亚硫酸钠0．1克，硫乙醇酸钠0．5克，琼脂0．7克，水1000毫升。
【制法】将蛋白胨溶解于750毫升水中，另取一烧杯装250毫升水和琼脂，加热溶解，将葡萄糖等其他成分溶于蛋白胨内，再和琼脂混合，校正pH值为7．2，分装于试管或三角瓶内，15磅灭菌20分钟，备用。
【用途】供厌氧菌和胎儿弯杆菌培养用。
注：欲加分离胎儿弯杆菌，可将培养基中的琼脂量增加到15－20克，再加入10%的牛血清，制成平板，效果较好，如污染较重时，可加入万古霉素10毫克／毫升，多粘菌素B2．5单位／毫升。
(26)疱肉培养基(熟肉培养基)
【成分】牛肉渣或肝块，肉块适量，肉汤或肉膏汤(pH7．4)。
【制法】取肉浸液剩余的牛肉渣装入试管中，高约3厘米，如肉块、肝块2－3克，并加入肉汤约5毫升或比肉渣高一倍。
每管液面上加入液体石蜡，高约0．5厘米，15磅灭菌30分钟后备用。
【用途】分离厌氧菌用。
注：使用时应将疱肉培养基先置于水浴中煮沸10分钟，以驱除管内存留的氧气。
(27)葡萄糖血液琼脂
细菌用培养基一览表
【成分】灭菌葡萄糖琼脂100毫升，脱纤无菌鲜血10毫升。
【制法】先将灭菌葡萄糖琼脂溶化并冷至55℃后，以无菌手续加入血液混匀，作成斜面或倾入灭菌平皿内制成平板，放置37℃温箱内，培养18－24小时，无菌检查后应用。
【用途】培养厌氧菌或营养要求较高的细菌用。