六硝基二苯胺试纸法

出处：按学科分类—农业科学农业出版社《土壤农化分析手册》第312页（3048字）

作物组织中的钾基本上都是以离子状态存在，它的含量多少对土壤钾素供应状况极为敏感，故可作为土壤钾素供应状况的指标。

六硝基二苯胺是弱有机酸，难溶于水，能溶于微碱液中，呈桔红色，在酸性条件下则褪色呈淡黄色，六硝基二苯胺与钾作用生成六硝基二苯胺钾盐沉淀，用酸处理时，就不再褪色而保持桔红色不变。可用不同浓度的六硝基二苯胺试剂浸或滴在滤纸上，干燥后制成不同标号的试纸或试斑，它们对钾的反应灵敏度各不相同，试斑的浓度愈大，对钾的反应灵敏度也愈高。

1．试剂配制

(1)0．5N HCl 1ml浓HCl加入到23ml蒸馏水中。

(2)三级六硝基二苯胺钾试纸的制备

①称取0．6g六硝基二苯胺及0．6g碳酸钠(Na₂CO₃)放在小烧杯中，在沸水浴中加水搅拌直至完全溶解。如有沉淀可过滤到25ml容量瓶中，再用少量水洗滤纸，冷后加水定容至刻度。此液中六硝基二苯胺的浓度大约为2．4%。

②吸取(1)液8ml，放入25ml容量瓶中，加水稀释至刻度。此液浓度约为0．77%。

③吸取(2)液10ml，放入25ml容量瓶中，加水稀释至刻度。此液浓度约为0．3%。

标准钾试纸的制备：用细口皮头滴管(最好用塑料眼药瓶以细皮管接上注射针头)分别吸取上述所配的(1)、(2)、(3)三种溶液依次滴在长约5－8cm、宽约1cm的定性滤纸上，圆点直径为0．5－0．8cm左右，用热风吹干或在85℃以下烘干(必要时也可阴干)。纸条上的三个色点应分别为“桔红”、“桔橙”、“桔黄”三种颜色。

表12-5 三级钾试纸各色点的灵敏度

(3)六级六硝基二苯胺钾试纸的制备称取六硝基二苯胺2g，放入烧杯内，加水70－80ml，加热、搅拌，逐渐加入10%碳酸钠(Na₂CO₃)直至六硝基二苯胺溶解为止(约需15－20ml)，定容至100ml，此为2%六硝基二苯胺母液。分别取母液20、12．5、8．5、6．2、3．5ml稀释到50ml，摇匀，成为0．8、0．5、0．34、0．25、0．14%的六硝基二苯胺液。另取定性滤纸剪切成适当大小的长方形纸片，分别浸入上述五种不同浓度的六硝基二苯胺溶液中，待纸条浸透后，立即取出，平放在洁净玻璃板上，用电热吹风机吹干(或放在85℃烘箱内烘干)。由此所制得的试纸分别对1000、1500、2000、3000及4000ppm以上的钾(K)浓度有正的呈色反应，其试纸标号即分别为1000、1500、2000、3000、4000号。再取已制备好的1000号钾试纸，在0．8%六硝基二苯胺液中重浸一次，仍按上法干燥，由此所得试纸对500ppm以上的钾(K)浓度有呈色反应，此即为500号钾试纸。试纸的蒸发面为正面，应作出识别记号。

(4)钾试纸的校正和标定由于六硝基二苯胺试剂出厂批号不同，质量有所差异，加之纸质及制备时操作细节和条件的不同，所以分次制成的钾试纸对钾的反应往往不很一致，因此，对钾试纸应进行校正。校正用的标准钾溶液配法为：称取氯化钾(KCl)0．7627g溶于100ml水中，此为4000ppm的钾标准液，再按表12-6中毫升数配制不同浓度的标准钾溶液。

钾试纸的校正办法：用不同浓度的钾溶液，由稀到浓或由浓到稀逐一测试其呈色反应。先在钾试纸上加一小滴标准钾液，1－2min后加0．5N盐酸，观察颜色变化，如留有桔红色圆斑，

表12-6 毫升数配制不同浓度的标准钾溶液

其钾反应为正(显色)；如转呈柠檬黄色，钾反应为负(褪色)，如有桔红色痕迹，钾反应为微弱。具体校正法是：先用500、1000ppm标准钾液分别加在Ⅰ级钾试点上，待干后，加0．5N盐酸1小滴，观察是否褪色，如Ⅰ级钾试点浓度适当，应当是加上500ppm标准钾液的褪色，而加上1000ppm标准钾液的能保持深桔红色不褪；如果在Ⅰ级钾试点上500ppm标准钾液不褪色(用酸后，以下同)，说明Ⅰ级钾试点上六硝基二苯胺的浓度太大，应略稀释后再试；如果在Ⅰ级钾试点上用1000ppm标准钾液试后也同样褪色，说明Ⅰ级钾试点上六硝基二苯胺的浓度太低，应适当增加后再试，如此反复试验，直到合标准为止。Ⅱ级钾试点用1500、2000ppm标准钾液测试，应当是1500ppm钾液试时能褪色、2000ppm标准钾液不褪色为合格，Ⅲ级钾试点用2500、3000ppm标准钾液测试，应当是2500ppm钾液测试时褪色，3000ppm不褪色为合格。上述Ⅱ、Ⅲ级钾试点如果不符合要求，都应像试Ⅰ级钾试点那样调正六硝基二苯胺浓度。

(5)使用六硝基二苯胺时应注意

①六硝基二苯胺是爆炸品，不应用加热方法干燥，目前供应的六硝基二苯胺有的是加了水的，为了准确标重，可将带水的六硝基二苯胺先放置在滤纸上(3－5层)吸去一部分水分，再放入干燥器内，待干燥后再称重配制。

②六硝基二苯胺的浓液在冷却后有结晶析出，影响浓度，最好当天配制，当天使用。如出现结晶可用温水浴加温，待溶解后才能应用。

③六硝基二苯胺与皮肤接触时，易引起过敏性皮炎，配制时应戴防护手套。

④制成的六硝基二苯胺钾试纸应避热、防潮、蔽光，注意保存，切勿与含钾物质、氨气和酸接触。最好保存在密封的塑料袋内。时间长了，要用标准钾液重新标定。

2．测定步骤将作物组织汁液1小滴加在钾试纸的每个试斑上(图12-1)或六级钾试纸的各级标号试纸的正面，1－2min后在试点上各加1小滴0．5N盐酸，观察其颜色变化，以确定汁液中钾的浓度。也可把作物组织(水稻用叶鞘，棉花用叶柄)横切开，直接挤压出汁液在钾试纸上，再按上法加1小滴盐酸，观察其颜色变化。