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细胞光度法

书籍:方法大辞典

出处:按学科分类—自然科学总论 山东人民出版社《方法大辞典》第229页(536字)

又称显微分光光度法。

利用细胞内一定物质吸收一定波长的光线的原理测定该物质含量的方法。各种物质吸收不同波长的光,有的物质可吸收紫外线,如核酸和蛋白质,其吸收光的波长分别为260nm和280nm。有的物质本身或经染色后可吸收可见光,如脱氧核糖核酸经孚尔根染色后,可吸收波长为550-575nm的可见光,含酪氨酸的蛋白质经米伦反应后可吸收波长为355nm的可见光,多糖经PAS染色则可吸收波长约550nm的光线。

测定物质吸收光量的多少,即可显示出该物质的相对含量,这种测定装置称为细胞光度计。

细胞光度计是由光源、单色仪、显微镜、光倍增器等部件组成。通过更换光源和光学系统,可测定紫外光或可见光。

当单色平行光束穿过有色透明液体时,溶液中有色物质的浓度与吸收的光量(光密度)成正比。物质吸收的光量可直接用光倍增器测出,或通过显微镜测定经校正的照像底片的光密度的方法测出。

例如,用细胞光度计测定经孚尔根染色后的标本吸收550nm光的光密度,即可计算出标本中脱氧核糖核酸的含量。

细胞光度法是生物化学和细胞生物学中测定物质含量的有用技术。

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