相差显微技术

出处：按学科分类—自然科学总论 山东人民出版社《方法大辞典》第232页（660字）

利用相差显微镜观察活细胞的方法。

相差显微镜有增强标本反差和突出结构立体形象的效果。相差显微镜是在1935年由荷兰物理学家泽奈克发明的，其原理是把显微镜中的光路的光程差转变为振幅差，从而使标本的明暗对比更加明显。活细胞是半透明的，在普通光学显微镜下很难看清内部结构，而在相差显微镜下，明暗对比度加大，从而可将细胞内部结构显示清楚。

相差显微镜在构造上并不复杂，只是在光源和物镜中分别增添了一个附件。前者增添的是一个环形光阑，光阑上有一环形透明区，光线穿过此区形成筒状光路，经聚光器形成空心光锥，焦聚到标本上。在物镜中增添的是一片相板，相板上有一凹形或凸形环形区，光线未穿过标本时，恰好经此环形区，聚焦于后焦面上。光线穿过细胞时，发生衍射，并使光程延迟了1／4个波长。衍射光线进入物镜后，不再通过相板环形区。

未穿过细胞的光线进入物镜后仍通过环形区，结果其光程比衍射光推迟或提前了1／4波长。两组光线经相板后，光程彼此相差1／2波长或同步。

两组光线合轴后，发生相互干涉现象，在相差1／2波长时，光波振幅变小，使透过标本的光强变暗。如果是同步时，光波振幅增大，使透过标本的光强变亮。

前者称为正反差，后者称为负反差。由于标本成象后，或更加变暗，或更加变亮，与背景的反差加大，因而相差显微镜的成象要比普通显微镜清晰得多。

相差显微镜特别适于观察活组织和活细胞，是组织培养工作的必需设备。