核酸分子杂交

出处：按学科分类—自然科学总论 山东人民出版社《方法大辞典》第246页（852字）

不同来源的核酸单链之间，由于互补的碱基顺序发生共价键的结合出现稳定双链区的这种分子杂交技术，称为核酸分子杂交。

是分子遗传学中的重要研究方法，也是检测重组DNA分子一种很好的手续。

分子杂交技术是根据两条单链DNA(或DNA与RNA)中互补碱基顺序能专一配对的原理进行的。

在一定条件下，单链DNA或RNA能与另一条单链DNA互补的碱基形成氢键，从而使两条单链杂交成双键DNA分子。通常利用已标记的某一DNA(或RNA)片段作为探针，探测重组DNA分子中是否有与探针同源的DNA顺序。

根据杂交原理和操作条件的不同，以及单链核酸所处的状态，可分为液相，固相和原位分子杂交。目前大多采用：(1)萨瑟思吸印法，是1975年E·M萨瑟思建立起来的一种方便易行的液、固相杂交方法。用来定位克隆DNA中的特异序列和鉴定真核生物总DNA降解物中的特异序列。主要是将待测的DNA通过酶切、电泳、分离到的大小DNA片段吸印到硝酸纤维素膜上，与³²P标记的DNA探针或RNA探针杂交，放射自显影显示与放射性探针的互补区带，达到检测特异序列的目的。

(2)诺森吸印法，1977年诺森首创的检测某一特定的RNA分子的方法，原理同萨瑟思吸印法，不同之处在于将待测的RNA片段吸印到重氮苄氧甲基(DBM)纤维滤膜或滤纸上，然后与探针DNA杂交，放射自显影检测。(3)原位分子杂交，也是一种固相杂交技术，它是把普通细胞学技术，核酸分子杂交技术和放射自显影技术结合起来的特殊技术，待测DNA处在未经抽提的细胞染色体上，并在原来位置上被变性，再和探针进行分子杂交，用放射自显影或电子显微镜观察，直接检出互补顺序位置。1975年霍格内斯提出的菌落原位杂交和1977年戴维斯提出的噬菌体原位杂交等，都是将菌落或噬菌斑中所含DNA直接与DNA探针进行杂交，快速大量地筛选含特殊DNA序列的菌落或噬菌斑。