CBBG－250快速测定蛋白质含量

出处：按学科分类—医药、卫生 中国科学技术出版社《食物营养分析实用手册》第118页（1388字）

1976年布雷福德(Bradford)提出应用考马斯亮蓝G250(Coomassie Brilliant Blue G－250)与微克为单位的蛋白质能简便地定量，而且重现性很好。这个方法是利用CBBG－250具有红色和青色2种色调，即在游离状态下呈红色型，但和蛋白质结合就变为蓝色(青色)．色素对可见光谱的最大吸收值从465毫微米到595毫微米变化，并且表现出在595毫微米处的吸收值与溶液中蛋白质含量有线性关系。因此可以对蛋白质进行定量测定。

蛋白质和色素结合约在2分钟达到平衡，完成反应很快，蛋白质－色素结合物在室温下，1小时内保持着稳定的分散状态，有利于分析操作。该法测定范围1～1000微克。

试剂

(1)考马斯亮蓝G－250溶液：称考马斯亮蓝G－250100毫克，溶于50毫升95%乙醇中，加入100毫升85%的磷酸，最后加蒸馏水到1000毫升，混匀。此溶液常温保存1个月。

(2)0．25%氢氧化钠溶液。

(3)蛋白质标准溶液：称取含牛血清白蛋白100毫克，溶于100毫升蒸馏水中，混匀，吸取5毫升此溶液，加蒸馏水稀释至50毫升，即为100微克／毫升牛血清白蛋白标准溶液．

操作步骤

1．标准曲线的制备：取牛血清白蛋白标准液(100微克／毫升)0，0．2，0．4，0．6，0．8，1．0毫升，分别放在10毫升的刻度试管中，加蒸馏水至1毫升，再加考马斯亮蓝G－250溶液5毫升，混匀，室温2分钟后在波长595毫微米处，在721型分光光度计进行比色测定。以光密度值为纵坐标，以标准蛋白浓度为横坐标，制备标准曲线。

2．样品的测定：谷物或植物样品烘干、粉碎，称0．05～0．1克置50毫升容量瓶中，加入0．25%氢氧化钠溶液5毫升。在室温下放置过夜或在40℃下振荡提取30分钟，以蒸馏水定容至刻度，混匀，静置，即为样品蛋白提取液。

取样品液1毫升，加考马斯亮蓝G－250溶液5毫升，混匀，在室温下放置2分钟，在595nm处进行比色测定，读取光密度值。查标准曲线即可算出样品中蛋白质含量。

3．计算：

式中：A：样品液蛋白质含量(微克)；

W：样品称重(克)；

1：测定液体积(毫升)；

50：测定液总体积(毫升)；

10⁶：换算克为微克的系数；

100：换算为百分含量。