超氧化物歧化酶(SOD，从猪血中提取)

出处：按学科分类—工业技术 企业管理出版社《精细化学品制备手册》第328页（778字）

制法

(1)分离血球 取新鲜猪血，事先加入猪血体积1／7的3．8%柠檬酸三钠溶液，搅拌均匀，以3000r／min的速度离心15min，除去黄色血浆，收集红血球。

(2)除血红蛋白 红血球用2倍0．9%氯化钠溶液离心洗涤3遍，然后向洗净的红血球加入等体积去离子水，剧烈搅拌30min，于0～4℃静置过夜。再向溶血液中分别缓慢加入0．25倍体积的预冷乙醇和0．15倍体积的预冷氯仿，搅拌15min左右，静置30min，然后用离心法除去沉淀，收集微带蓝色的清澈透明粗酶液体。

(3)沉淀 向粗酶液体中加入等量冷丙酮，搅拌均匀，即有大量白色沉淀产生，静置30min，用离心法收集沉淀物。

(4)热变 把沉淀物溶于pH值为7．6的K₂HPO₄－KH₂PO₄缓冲液中，加热到55～65℃，恒温20min，然后迅速冷却到室温，离心收集上清液，弃去沉淀物。在上清液中加入等体积的冷丙酮，静置30min，离心分出沉淀，脱水干燥即得SOD粗品，可用于化妆品或食用SOD。

(5)DEAE－Sephadex A－50分离纯化 把SOD粗品用pH值为7．6的K₂HPO₄－KH₂PO₄缓冲液溶解，用离心法除去杂质，将上清液加入DEAE－Sephadex A－50离子交换柱，用2．5K₂HPO₄－KH₂PO₄缓冲液进行梯度洗脱，收集具有SOD的活性峰。将洗脱液装入透析袋中，在蒸馏水中透析，超滤浓缩透析液，然后冷冻干燥，即得精制SOD产品。