噻苯咪唑(TBZ)
出处：按学科分类—工业技术 中国轻工业出版社《食品添加剂分析检验手册》第303页（4799字）
结构式：
分子式：C10H7N3S
相对分子质量：201．24
一、噻苯咪唑的鉴别试验
1．试剂和溶液
1．1 盐酸溶液：1／100(体积分数)。
1．2 盐酸对苯二胺。
1．3 锌粉。
1．4 硫酸铁铵、硫酸。
2．操作步骤
2．1 称取本品5mg，加盐酸溶液5mL溶解，然后加盐酸对苯二胺3mg溶解，接着加锌粉约100mg，放置2min时，产生硫化氢臭味，在此液中加入硫酸铁铵－硫酸试剂0．5mL时，溶液由蓝变成蓝紫色。
2．2 称取本品5mg，加盐酸溶液1000mL溶解，此液在波长298～306nm及239～247nm处有最大吸收峰，波长254～262nm处有最小吸收峰。
二、噻苯咪唑的含量测定
1．试剂和溶液
1．1 乙酸。
1．2 无水乙酸。
1．3 乙酸汞溶液。
1．4 0．1mol／LHClO4标准溶液。
1．5 结晶紫·乙酸液。
2．测定方法
精确称取干燥后的噻苯咪唑约0．2g，加非水滴定用乙酸10mL，加温溶解，冷后，加无水乙酸50mL及非水滴定用乙酸汞试剂1mL，用0．1mol／LHClO4溶液滴定，加指示剂结晶紫·乙酸液1mL，终点由紫色经蓝色再变成绿色。另外，按此法进行空白试验予以校正。
1mL0．1mol／LHClO4溶液相当于20．125mgC10H7N3S。
三、食品中噻苯咪唑的测定
(一)气相色谱法
1．原理
噻苯咪唑在弱碱性下易溶于乙酸乙酯，在酸性下易溶于水，利用此种性质进行提取和精制，然后用火焰光度检测器(FPD)进行气相色谱分析。
2．试剂和溶液
2．1 无水乙酸钠。
2．2 吩噻嗪(Phenathiazine)。
2．3 无水硫酸钠。
3．测定方法
3．1 样品溶液的制备 准确称量样品约50g，置搅拌器中，加2～3g乙酸钠，10g滤纸末、80～100g无水硫酸钠混匀。加入约120mL乙酸乙酯，搅拌2～3min，抽滤。容器用乙酸乙酯约20mL洗涤3次，洗液抽滤，洗液与滤液合并。以少量乙酸乙酯定量地移入分液漏斗，加50mL1mol／LNaOH溶液，充分振摇，弃去水层。乙酸乙酯层再加20mL0．1mol／LHCl酸溶液，振摇，分取水层，并入分液漏斗，水层加6mL1mol／LNaOH溶液及大约10g氯化钠溶解，加20mL乙酸乙酯充分振摇，乙酸乙酯提取液用滤纸过滤(事先在漏斗的滤纸上放置大约5g无水硫酸钠)，水层加20mL乙酸乙酯反复操作一次，分液漏斗以8～10mL乙酸乙酯定量地冲洗，洗液过滤，合并全部滤液，准确加乙酸乙酯至50mL。量取此液40mL，置入浓缩装置，于50℃以下减压浓缩至干。准确加入内标物标准液2mL，振摇溶解，作为样品溶液。
3．2 标准液的制品。
3．2．1 噻苯咪唑标准液：准确称取噻苯咪唑50mg，加乙酸乙酯至100mL，准确量取其2mL，加乙酸乙酯至100mL作为标准液(此液1mL含噻苯咪唑10μg)。准确量取标准液1mL、2mL、3mL、4mL及5mL，置浓缩器中于50℃以下减压浓缩至干，各加内标物标准液，准确成2．0mL(此液分别含有噻苯咪唑5μg、10μg、15μg、20μg、25μg)。
3．2．2 内标物标准液：准确称取吩噻嗪50mg，加乙酸乙酯溶解，准确至100mL。准确量取此液2mL，加乙酸乙酯至100mL。取此液按本节二、“2．测定方法”操作进行气相色谱分析，不得出现吩噻嗪以外的峰。
3．3 测定。
3．3．1 测定条件：用具火焰光度检测器的气相色谱仪(FPD—GC)按下列条件测定：
填充剂：60～80目经有机硅烷处理的气相色谱用硅藻土担体加入含3%聚砜的氯仿溶液，将三氯甲烷蒸发干燥；
色谱柱：玻璃管，内径3～4mm，长75～100cm；
柱温：250～270℃恒温；
进样口温度及检测器温度：290℃；
载气：氮气，调节流速，使吩噻嗪峰约在5min后出现。
3．3．2 标准曲线：取标准曲线用标准液各4μL，注入气相色谱仪，依峰高比值来绘制标准曲线。
3．3．3 定量 量取样品溶液4μL，注入气相色谱仪，根据峰高比和标准曲线求样品溶液中噻苯咪唑浓度(μg／mL)，再由式(10－10)计算样品中噻苯咪唑含量(g／kg)
4．分析结果的表述
式中 ρ——样品溶液中噻苯咪唑浓度，μg／mL
m——取样质量，g
(二)荧光分光法
1．原理
利用噻苯咪唑在酸性下可溶于水，在碱性或中性下不溶于水的性质，用液液分配法反复进行精制除去柑桔油中挥发油。噻苯咪唑具有荧光，在盐酸溶液中的荧光强度比其他溶剂高，根据盐酸溶液中荧光强度来测定样品中噻苯咪唑浓度。
2．试剂和溶液
2．1 无水乙酸钠。
2．2 乙酸钠缓冲液 无水乙酸钠33g及氯化钠200g加水溶成1000mL。
2．3 乙酸乙酯。
2．4 (40g／L)氢氧化钠溶液。
2．5 10／L(体积分数)盐酸溶液。
3．测定方法
3．1 样品溶液的制备 准确称取样品约50g，置于搅拌器杯中，加50mL，乙酸钠缓冲液及100mL乙酸乙酯，搅拌大约5min，置离心管中，离心分离，(约5min，约3000r／min。下同)，分取乙酸乙酯层于分液漏斗。水层及残渣置于混合器，加70mL乙酸乙酯搅拌，离心分离，分取乙酸乙酯层，并入分液漏斗，再以50mL乙酸乙酯提取一次，并入分液漏斗。
乙酸乙酯层中加50mL氢氧化钠溶液，充分振摇，弃去水层。再加50mL水充分振摇，弃去水层。然后于乙酸乙酯层中加50mL盐酸溶液，振摇10min，分取水层于第2只分液漏斗。乙酸乙酯层再加50mL盐酸溶液同样操作一次，分次水层并入第2只分液漏斗。第2只分液漏斗加20mL氢氧化钠溶液，再加30mL乙酸乙酯，振摇10min，分取乙酸乙酯层于第3只分液漏斗中。水层加30mL乙酸乙酯再反复操作一次，分取乙酸乙酯层并入第3只分液漏斗，加水30mL，振摇，弃去水层。
第3只分液漏斗的乙酸乙酯层中加20mL盐酸溶液，振摇10min，分取水层于100mL容量瓶。乙酸乙酯加20mL盐酸溶液，反复操作多次，分取水层并入容量瓶，准确加入盐酸溶液至100mL，作为样品溶液。
3．2 标准液的制备 准确称取噻苯咪唑20mg，加盐酸溶液至200mL，取此液5mL，准确加水至500mL，作为标准液(此液1mL含噻苯咪唑1μg)。
准确量取标准液0，2mL，4mL，6mL，8mL及10mL，各加盐酸溶液至10mL，作为标准曲线用标准液(此溶液1mL各含噻苯咪唑0．0，0．2μg，0．4μg，0．6μg，0．8μg，1μg)。
3．3 测定。
3．3．1 测定条件用荧光光度计，测定条件为：激发波长300nm，荧光波长350nm，液层厚1cm。
3．3．2 标准曲线：测定各标准曲线用标准液的荧光强度，绘制标准曲线。
3．3．3 定量：测定样品的荧光强度，根据荧光强度在标准曲线上求样品溶液中噻苯咪唑浓度(μg／mL)，由式(10－11)计算样品中噻苯咪唑含量(g／kg)。
4．分析结果的表述
式中 ρ——样品溶液中噻苯咪唑浓度，μg／mL
m——样品质量，g
(三)比色法
噻苯咪唑在对苯二胺存在下，于弱酸性溶液中被金属锌粉还原，可生成硫化氢型络合物(无色母体)，再用硫酸高铁铵氧化则生成蓝色的噻嗪染料。此色素用丁醇提取，于波长605nm测吸光度。此法美国已采纳为食品中噻苯咪唑定量的公定法，日本列为噻苯咪唑的标准规格的鉴别实验。
图10－3 噻苯咪唑的气相色谱图
图10－4 噻苯咪唑的标准曲线
I．S．：内标物的峰高 TBZ：噻苯咪唑的峰高