乙酰磺胺酸钾(AK糖)
出处：按学科分类—工业技术 中国轻工业出版社《食品添加剂分析检验手册》第354页（4067字）
结构式：
分子式：C4H4NO4SK
相对分子质量：201．24
一、乙酰磺胺酸钾的鉴别
1．试剂和溶液
1．1 冰醋酸。
1．2 六亚硝基钴钠 100g／L溶液。
2．操作步骤
2．1 紫外吸收 取0．01g试样，溶于1000mL蒸馏水中，该溶液在波长(227±2)nm处有吸收峰。
2．2 颜色反应 取0．3g试样，加入1mL冰醋酸和5mL水，然后滴加数滴10%亚硝基钴钠溶液，即生成黄色沉淀。
二、乙酰磺胺酸钾的含量测定
1．原理
采用非水滴定法测定乙酰磺胺酸钾的含量。
2．试剂和溶液
2．1 冰醋酸。
2．2 乙酸酐。
2．3 结晶紫指示液 0．5%乙酸溶液。
2．4 无水乙酸 取冰乙酸适量，按含水量计算，1g冰乙酸加乙酸酐5．22mL即得。
2．5 高氯酸0．1mol／L标准溶液。
3．仪器
一般实验室仪器和自动滴定管。
4．试样的制备
取10g试样，研磨成粉，于105℃温度烘箱干燥2h，至恒重，存放于干燥器中备用。
5．测定方法
称取0．15g已干燥失重的试样(称准至0．0002g)，加入50mL无水乙酸，5．0mL乙酸酐，加热摇溶后，冷至室温，加入2滴结晶紫指示液，用0．1mol／L高氯酸标准溶液滴定至蓝绿色为止。同时做试剂空白。
6．分析结果的表述
乙酰磺胺酸钾质量分数(w)按式(11－11)计算：
式中 c——高氯酸标准溶液浓度mol／L
△V——试样消耗高氯酸标准溶液的体积与空白试验消耗高氯酸标准溶液的体积之差，mL
m——试样质量，g
0．2012——每毫摩C4H4N04SK的质量，g／mmol
三、饮料中乙酰磺胺酸钾的测定
1．原理
样品中乙酰磺胺酸钾经高效液相反相柱C18分离后，以保留时间定性、峰高或峰面积定量。
2．试剂和溶液
2．1 甲醇 优级纯。
2．2 乙腈 色谱纯。
2．3 0．02mol／L(NH4)2SO4溶液 称取硫酸铵2．642g，加水溶解至1000mL。
2．4 硫酸溶液 10%(体积分数)。
2．5 中性氧化铝 层析用，100～200目。
2．6 乙酰磺胺酸钾、糖精钠、咖啡因标准贮备液 精密称取乙酰磺胺酸钾、糖精钠咖啡因各0．1000g，用移动相溶解后移入100mL容量瓶中，并用移动相稀释至刻度，即含乙酰磺胺酸钾、糖精钠、咖啡因各1mg／mL溶液。
2．7 乙酰磺胺酸钾、糖精钠、咖啡因标准使用液 吸取2．6项贮备液2mL于50mL容量瓶中，加移动相至刻度。摇匀，然后分别吸取此液1．0mL，2．0mL，3．0mL，4．0mL，5．0mL于 10mL容量瓶中，各加移动相至刻度，摇匀，即得各含乙酰磺胺酸钾、糖精钠、咖啡因0．004mg／mL，0．008mg／mL，0．012mg／mL，0．016mg／mL，0．020mg／mL的混合标准液系列。
2．8 移动相 0．02mol／L硫酸铵(740～800)+甲醇(170～150)+乙腈(90～50)+10%H2SO4(1mL)。
3．仪器
3．1 高效液相色谱仪。
3．2 超声清洗仪(溶剂脱气用)。
3．3 离心机。
3．4 抽离瓶。
3．5 G3耐酸漏斗。
3．6 微孔滤膜0．45μm。
3．7 层析柱 用10mL注射器代替，内装3cm高的中性氧化铝。
4．测定方法
4．1 样品处理。
4．1．1 汽水：将样品温热，搅拌除去二氧化碳或超声脱气。吸取2．5mL样品于25mL容量瓶中，加移动相至刻度，搅匀后，溶液通过微孔滤膜过滤，滤液备作HPLC分析用。
4．1．2 可乐型饮料：将样品温热，搅拌除去二氧化碳或超声脱气，吸取已除去二氧化碳的样品2．5mL，通过中性氧化铝柱，待样品液流至柱表面时，用移动相洗脱，收集25mL洗脱液，摇匀后超声脱气，此液备作HPLC分析用。
4．1．3 果茶、果汁类食品：吸取2．5mL样品，加约20mL水，混匀后，离心15min(4000r／min)，上清液全部转入中性氧化铝柱，待水溶液流至表面时，用移动相洗脱。收集洗脱液25mL，混匀后，超声脱气，此液作HPLC分析用。
4．2 测定。
4．2．1 HPLC参考条件：
分析柱：大连化物所生产的Spherisorb C184．6mm×150mm，粒度5μm
移动相：0．02mol／L硫酸铵(740～800)+甲醇(170～150)+乙腈(90～50)+10%H2SO4(1mL)
波长：214nm
流速：0．7mL／min
4．2．2 标准曲线：分别进含乙酰磺胺酸钾、糖精钠、咖啡因0．004mg／mL，0．008mg／mL，0．012mg／mL，0．016mg／mL，0．020mg／mL混合标准使用液各10μL，进行HPLC分析。然后以峰面积为纵坐标、以乙酰磺胺酸钾、糖精钠、咖啡因的含量为横坐标，画标准曲线。
4．2．3 样品测定：进4．1项的样品处理后的样品溶液10μL，测定其峰面积，从标准曲线查得测定液中乙酰磺胺酸钾、糖精钠、咖啡因的量。HPLC色谱图如图11－3所示。
图11－3 HPLC色谱图
1－乙酰磺胺酸钾
2－糖精钠
3－咖啡因
4－天门冬酰苯丙氨酸甲酯
5．分析结果的表述
式中 x——样品中乙酰磺胺酸钾、糖精钠、咖啡因的含量，g／kg或g／L
c——由标准曲线上查得进样液中乙酰磺胺酸钾、糖精钠、咖啡因的含量，mg／mL
V1——样品稀释液总体积，mL
V2——HPLC测定时进样的体积，mL
m——样品质量，g
本方法仪器检出限0．04μg；方法检出限：乙酰磺胺酸钾、糖精钠、咖啡因各0．004mg／mL。