沙门氏菌的检验

出处：按学科分类—工业技术 中国轻工业出版社《焙烤工业实用手册》第632页（2688字）

1．培养基和试剂

(1)缓冲蛋白胨水(BP)：按本节九 (三)28规定。

(2)氯化镁孔雀绿增菌液(MM)：按本节九 (三)22规定。

(3)四硫酸钠煌绿增菌液(TTB)：按本节九 (三)23规定。

(4)亚硒酸盐胱氨酸增菌液(SC)：按本节九 (三)24规定。

(5)亚硫酸铋琼脂(BS)：按本节九 (三)25规定。

(6)DHL琼脂：按本节九 (三)26规定。

(7)HE琼脂：按本节九 (三)8规定。

(8)WS琼脂：按本节九 (三)27规定。

(9)SS琼脂：按本节九 (三)9规定。

(10)三糖铁琼脂(TSI)：按本节九 (三)11规定。

(11)蛋白胨水(靛基质试剂)：按本节九 (二)5规定。

(12)尿素琼脂(pH7．2)：按本节九 (二)6规定。

(13)氰化钾(KCN)培养基：按本节九 (二)7规定。

(14)氨基酸脱羧酶试验培养基：按本节九 (二)4规定。

(15)糖发酵管：按本节九 (二)1规定。

(16)ONPG培养基：按本节九 (二)10规定。

2．沙门氏菌检验程序(图4－2－10)

图4－2－10 沙门氏菌检验程序

3．操作步骤

(1)前增菌和增菌。冻肉、蛋品、乳品及其他加工食品均应经过前增菌。各称取检样25g，加在装有225mL缓冲蛋白胨水的500mL广口瓶内。固体食品可先用均质器以8000～10000r／min打碎1min，或用乳钵加灭菌砂磨碎，粉状食品用灭菌匙或玻璃棒研磨使乳化，于36℃±1℃培养4h(干蛋品培养18～24h)，移取10mL，转种于100mL氯化镁孔雀绿增菌液或四硫酸钠煌绿增菌液内，于42℃培养18～24h。同时，另取10mL，转种于100mL亚硒酸盐胱氨酸增菌液内，于36℃±1℃培养18～24h。

鲜肉、鲜蛋、鲜乳或其他未经加工的食品不必经过前增菌。各取25mL(g)加入灭菌生理盐水25mL，按前法做成检样匀液；取25mL，接种于100mL氯化镁孔雀绿增菌液或四硫酸钠煌绿增菌液内，于42℃培养18～24h；另取25mL，接种于100mL亚硒酸盐胱氨酸增菌液内，于36℃±1℃培养18～24h。

(2)分离。取增菌液1环，划线接种于一个亚硫酸铋琼脂平板和一个DHL琼脂平板(或HE琼脂平板、WS或SS琼脂平板)。两种增菌液可同时划线接种在同一个平板上。于36℃±1℃下分别培养18～24h(DHL、HE、WS、SS)或40～48h(BS)，观察各个平板上生长的菌落，沙门氏菌Ⅰ、Ⅱ、Ⅳ、V、Ⅵ和沙门氏菌Ⅲ在各个平板上的菌落特征见表4－2－4。

表4－2－4 沙门氏菌属各群在各种选择性琼脂平板上的菌落特征

(3)生化试验。自选择性琼脂平板上直接挑取数个可疑菌落，分别接种三糖铁琼脂。在三糖铁琼脂内，肠杆菌科常见属种的反应结果见表4－2－5。

表4－2－5 肠杆菌科各属在三糖铁琼脂内的反应结果

注：+阳；－阴；+／－多数阳性，少数阴性。

表4－2－5说明在三糖铁琼脂内只有斜面产酸并同时硫化氢(H₂S)阴性的菌株可以排除，其他的反应结果均有沙门氏菌的可能，同时也均有不是沙门氏菌的可能。

在接种三糖铁琼脂的同时，再接种蛋白胨水(供做靛基质试验)、尿素琼脂(pH7．2)、氰化钾培养基和赖氨酸脱羧酶试验培养基及对照培养基各1管，于36℃±1℃培养18～24h，必要时可延长至48h，按表4－2－6判定结果。按反应序号分类，沙门氏菌属的结果应属于A₁、A₂和B₁，其他5种反应结果均可以排除。

表4－2－6 生化反应初步鉴别表

注：+表示阳性；－表示阴性。

反应序号A₁，可判断为沙门氏菌属。但如尿素、KCN和赖氨酸3项中有1项异常仍可按表4－2－7中判断为沙门氏菌。

表4－2－7 沙门氏菌判断表

反应序号A₂：补做甘露醇和山梨醇试验，甘露醇和山梨醇试验均为阳性者是沙门氏菌靛基质阳性变体(要求血清学鉴定结果)否则为缓慢爱德华氏菌。

反应序号B₁：补做ONPG试验，ONPG(+)为大肠埃希氏菌，ONPG(－)为沙门氏菌。

(4)血清反应。将一块洁净干燥的载物玻片，用接种环取诊断血清，滴加于玻片的一端，然后用接种环取培养物，细心地混匀于血清中，并以培养物混匀于另一端的生理盐水中，在3min内观察结果。若发现有凝集者为沙门氏菌培养物，否则应为均匀乳状、无凝集现象。