链球菌的检验

出处：按学科分类—农业科学 中国轻工业出版社《肉类工业手册》第792页（1993字）

链球菌在自然界分布较广，可存在于水、空气、尘埃、牛奶、粪便及人的咽喉和病灶中，根据其抗原结构、族特异性“C”抗原的不同，可进行血清学分群。按其在血平板上溶血的情况可分为甲型溶血性链球菌、乙型溶血性链球菌和丙型溶血型球菌。与人类疾病有关的大多属于乙型溶血性链球菌，其血清型90%属于A群链球菌，常可引起皮肤和皮下组织的化脓性炎症及呼吸道感染，还可通过食品引起猩红热、流行性咽炎的暴发性流行。

(一)器材

(1)温箱：(36±1)℃，水浴箱：(36±1)℃，显微镜，离心机。

(2)试管架，灭菌平皿，灭菌镊子，载玻片，灭菌小试管，灭菌吸管：1mL，5mL，灭菌乳钵，灭菌三角烧瓶：500mL。

(二)培养基和试剂

(1)葡萄糖肉浸液肉汤：在肉浸液肉汤内加入1%葡萄糖，匹克氏肉汤。

(2)血琼脂，人血浆，0．25%氯化钙，灭菌生理盐水，杆菌肽药敏纸片(含0．04IU)。

(三)检验程序

溶血性链球菌检验程序如图5－2－5所示。

图5－2－5 溶血性链球菌检验程序

(四)操作步骤

1．检样处理

称取25g固体检样，准备好225mL灭菌生理盐水，先加入数十毫升研成匀浆，再用剩余灭菌生理盐水分次全部转入三角瓶内，制成混悬液；液体检样可直接培养。

2．一般培养

将上述混悬液或液体检样直接划线于血平板，并吸取5mL接种于50mL葡萄糖肉浸液肉汤内，如检样污染较严重，可同时按上述量接种匹克氏肉汤，经(36±1)℃24h，挑取乙型溶血、圆形突起的细小菌落，在血平板上分离，然后观察溶血情况及革兰氏染色，并进行链激酶试验及杆菌肽敏感试验。

3．形态与染色

本菌呈球形或卵形，直径0．5～1μm，革兰氏染色阳性，链状排列，链长短不一，短者4～8个细胞组成，长者20～30个，链的长短常与细菌的种类及生长环境有关；液体培养中易呈长链；在固体培养中常呈短链；不形成芽胞，无鞭毛，不能运动。

4．培养特性

该菌营养要求较高，在普通培养基上生长不良，在加有血液、血清培养基中生长较好。溶血性链球菌在血清肉汤中生长时，管底呈絮状或颗粒状沉淀。血平板上菌落呈灰白色，半透明或不透明，表面光滑，有乳光，直径为0．5～0．75mm，为圆形突起的细小菌落，乙型溶血性链球菌周围有2～4mm界限分明、无色透明的溶血圈。

5．链激酶试验

(1)致病性溶血性链球菌能产生链激酶(即溶纤维蛋白酶)，此酶能激活正常人体血液中血浆蛋白酶原，使之成为血浆蛋白酶，而后溶解纤维蛋白。

(2)吸取0．2mL草酸钾血浆(草酸钾0．01g，加入5mL人血混匀，经离心沉淀，吸取上清液即为血浆)，加入0．8mL灭菌生理盐水，混匀，再加入0．5mL 18～24h培养的链球菌肉汤培养物及0．25mL 0．25%氯化钙，振荡摇匀。置(36±1)℃水浴中每隔数分钟观察一次(一般约10min即可凝固)，血浆凝固后，再注意观察及记录溶化的时间。溶化时间愈短，表示该菌产生的链激酶愈多，含量多时，20min内凝固的血浆即完全溶解。如无变化，应在水浴中持续放置2h，24h后再观察，如凝块全部溶解为阳性，24h后仍不溶解者为阴性。

6．杆菌肽敏感试验

挑取乙型溶血性链球菌浓菌液，涂布于血平板(肉浸液琼脂加入5%血液)上，用灭菌镊子夹取每片含有0．04单位的杆菌肽纸片，放于上述平板上，于(36±1)℃培养18～24h，如有抑菌现象即为阳性，可初步鉴定为A群链球菌，同时用已知阳性菌株作为对照。