电泳

出处:按学科分类—医药、卫生 中国科学技术出版社《临床厌氧菌检验手册》第124页(484字)

采用什么样的电泳装置,取决于各自实验室的条件。饮般主张垂直板状电泳,分离胶长度120mm,凝胶厚度0.75~1.5mm,分离胶含10%丙酰胺,2.7%交链N,N’-二亚甲基丙酰胺,0.375mTris-HCl,0.1%SDS,pH8.8。堆集胶含5%丙酰胺,2.7%交链N-N’-二亚甲基丙酰胺,0.125mTris-HCl,0.1%SDS,pH6.8,10mm长。

加样:最好采用10~15ml微量加样器,样本量10μl(10mg/ml)足够了,中间的槽通常包含参考株的样品,以检测和控制重复性,参考株样本中加0.001%的溴苯酚蓝作为电泳过程的标记。电极缓冲液为0.25mTris-HCl,0.192M甘氨酸,0.1%SDS,pH8.3,样本在15mA/0.75mm下电泳直至溴苯酚蓝通过分离胶移动100mm左右,通常需4小时。

凝胶染色:通常用考斯亮蓝R-250(0.125%)染色,最后用10%醋酸染色4小时。

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