常用培养基

出处：按学科分类—医药、卫生 中国科学技术出版社《临床厌氧菌检验手册》第163页（12375字）

(一)常用非选择性培养基

厌氧菌非选择性培养基种类较多，其中较为常用的有AN和GAN、EG、BHI、CDC等培养基，这些都是非选择性的基础培养基。

1．AN厌氧菌琼脂(Anaerobic agar)

除①以外为基础培养基PYMA。

除②后为液体培养基。

2．GAM培养基(Gifu anaerobic medium)

胨 15．0g

大豆胨 3．0g

消化血清粉 13．5g

酵母浸膏 5．0g

牛肉膏 2．0g

牛肝膏(粉) 1．2g

葡萄糖 3．0g

磷酸二氢钾 2．5g

氯化钠 3．0g

可溶性淀粉 3．0g

L－半胱氨酸 0．3g

硫乙醇酸钠 0．15g

胰蛋白胨 10．0g

蒸馏水 1000ml

琼脂根据需要加入 pH7．2

3．EG琼脂

马肉浸液 930ml

胨(3号) 10．0g

酵母浸膏 5．0g

磷酸氢二钠 4．0g

可溶性淀粉 0．5g

葡萄糖 1．5g

L－半胱氨酰盐酸盐 0．5g

1%去泡剂(Antifoam) 10ml

琼脂 15～18．0g

pH7．6～7．8

4．心脑琼脂(BHI)

牛脑浸出液 200ml

牛心浸出液 250ml

胨(Proteose Peptone) 10．0g

酵母浸膏(粉) 5．0g

葡萄糖 2．5g

氯化钠 5．0g

磷酸氢二钠 2．0g

半胱胺酸 0．5g

氯化血红素(0．5%)溶液 1ml

维生素K₁(1%)溶液 0．1ml

蒸馏水加至 1000ml，

pH7．6～7．8(pH7．4±O．2)

5．CDC厌氧血琼脂

胰酶酪解蛋白 15．0g

植物胨 5．0g

氯化钠 5．0g

酵母浸出粉 5．0g

1%氯化血红素 0．5ml

1%维生素K₁ 1ml

半胱氨酸 0．5mg

蒸馏水 1000ml pH7．4

6．硫乙醇酸盐培养基

胰酶解酪蛋白 17g

植物胨 3．0g

葡萄糖 6．0g

氯化钠 2．5g

硫乙醇酸钠 0．5g

L－半胱氨酸盐酸盐 0．25g

亚硫酸钠 0．1g

0．5%氯化血红素溶液 1ml

1%维生素K1溶液 0．1ml

蒸馏水 1000ml pH7．2～7．4

7．糖发酵基础培养基

胰蛋白胨 15．0g

酵母浸出粉 7．0g

L－半胱氨酸 0．25g

氯化钠 2．5g

维生素C 0．1g

硫乙醇酸钠 0．5g

溴麝香草酚蓝 0．01g

蒸馏水 1000ml pH7．0～7．2

8．药敏基础培养基(WC培养基)

胰酶酪解蛋白 10．0g

胨 5．0g

植胨 5．0g

酵母浸膏 5．0g

葡萄糖 1．0g

氯化钠 5．0g

L－精氨酸 1．0g

丙酮酸钠 1．0g

1%氯化血红素溶液 2ml

1%维生素K溶液 0．1ml

琼脂 15～18g pH7．2～7．4

基础培养基配制时注意事项：

(1)一般培养基经121℃高压灭菌15分钟后备用。

(2)维生素K₁和氯化血红素添加物最好滤过灭菌，待高压培养基冷却至50℃左右加入。

(3)加血(脱纤维羊或兔血)和抗生素宜冷却至45℃后加入。

(二)常用选择性培养基

1．胰胨酵母复合培养基 笔者使用PYMA培养基(详见非选择性培育基1)为基础灵活应用。

(1)选择肠杆菌时加入1%乳糖、2%伊红、水溶液2ml%和0．65%美蓝水溶液1ml%，或1%苯胺蓝水溶液0．5ml%和1%玫瑰红酒精溶液1ml%。

(2)加入0．01%NaN3，选择肠球菌。

(3)加入10%NaCl和3%脱纤维羊或兔血，选择葡萄糖球菌。

(4)加入4%乙酸钠或乙酸盐缓冲对，使pH5．0，选择兼性乳杆菌。

(5)加入链霉素50mg%，可用于选择酵母菌。

(6)加入3%血和0．025%L－半胱氨酸作厌氧菌计总数培养基。

(7)AN培养基加入卡那霉素(100ng／ml)、万古霉素(7．5ng／ml)及3%～5%脱纤维羊或兔血(下都称为血)，选择类杆菌。

(8)培养基加入0．01%新霉素，0．02%、0．025%L－半胱氨酸；选择类杆菌和韦荣氏球菌。

(9)加5%卵黄、1%乳酸、0．0025%中性红、0．04%环丝氨酸，选择梭菌。

(10)加入0．018%NaN3，0．025%L－半胱氨酸，1%半乳糖，0．00025%中性红，0．00125%溴甲酚绿，选择双歧杆菌。

(11)AN培养基中加入0．7mg%结晶紫，0．5mg%万古霉素，3mg%硫酸新霉素(或用BHI培基加入)，选择梭杆菌，有时还加入0．5mg%萘啶酮。

(12)AN培养基中加入1．5g%丙酸钠，0．02g%新霉素，1mg%粘杆菌素，0．005g%硫酸链霉素，用以选择优(真)杆菌。

(13)AN培养基中加入2%苯乙醇，0．7mg结晶紫，1mg%粘杆菌素，0．02g醋酸铊，用以选择消化球菌和消化链球菌。

(14)AN培养基加入0．1%煌缘溶液0．1ml%，5%乳酸钠2．5ml、1%桔黄霉素、吐温－800．1g%，用以选择韦荣氏球菌(桔黄霉素可用夹竹桃霉素代)。

上述各选择剂可根据需要和习惯加入GAM、EC、BHI、 CDC等基础培养基中，使之变成各类选择性培养基。

2．类杆菌选择性培养基 一般用GAM、AN、或CDC培养基作基础，加入万古霉素7．5μg／ml，卡那霉素100μg／ml及3%～5%血即可。如选择产黑色素类杆菌群和卟啉单孢菌，则宜加入3%～5%冻溶血，以利于黑色素的产生，或用BBE培养基。

3．梭杆菌选择性培养基 一般以BHI或AN作为基础培养基，加入结晶紫7μg／ml，万古霉素5μg／ml，硫酸新霉素30μg／ml，萘啶酮酸4μg／ml即可。

4．双歧杆菌选择性培养基 一般以AN或TPY作为基础性培养基，加入巴龙霉素50μg／ml，硫酸新霉素20μg／ml，丙酸钠1．5μg／ml，氯化锂0．3μg／ml。并宜根据不同菌种适当加入维生素B₁、B₂和B₆各1mg%，维生素C10～20mg%，泛酸钠1mg%及植物生长素1mg%。

附：TPY培养基

胰酶水解酪蛋白 10．0g

植物胨 5．0g

葡萄糖 5．0g

酵母浸膏 3．0g

肝浸液 40ml

吐温－80 1．0g

盐溶液 10ml

混合溶液 10ml

蒸馏水 加至1000ml

pH7．2。

(1)盐溶液：K₂HPO₄20．0g，MgCl₂·6H₂O5．0g，ZnSO₄·7H₂O25g，CaCl₂1．5g，FeCl₃0．5g，加蒸馏水至100ml。

(2)混合溶液：维生素B₁100mg，维生素B₂100mg，维生素B₆100mg，泛酸钠10．0mg，生物素1mg，加蒸馏水至100ml，滤过灭菌。或西红柿汁浓缩液(25%～50%v／v)。

5．乳杆菌选择性培养基可用MRS或AN培养基，其pH控制在6．0以下。

附：MRS培养基

酪蛋白胨 10．0g

牛肉膏 10．0g

酵母浸膏 5．0g

葡萄糖 20．0g

磷酸氢二钾 5．0g

柠檬酸三氨 2．0g

乙酸钠 5．0g

硫酸镁 0．5g

硫酸锰 0．2g

吐温－80 1．0g

pH6．0(笔者常用pH5．5～5．8)

6．丙酸杆菌选择性培养基 可用TSA或TYG或AN或BHI等培养基作为基础培养基，添加多粘菌素20μg／ml，灭滴灵4μg／ml，其中TSA培养基为：

酪蛋白胨 10．0g

酵母浸膏(粉) 5．0g

葡萄糖 3．0g

大豆胨 5．0g

吐温－80 1．0g

L－半胱氨酸 0．3g

氯化钠 5．0g

蒸馏水 加至1000ml

pH7．3。

7．优杆菌选择性培养基 可用TVH或BHI或AN作为基础培养基，添加5%ES液(ES添加液：丙醇钠30．0g，新霉素0．4，粘杆菌素20mg，硫酸链霉素0．1g，加蒸馏水至100ml。

(1)TVH培基：

酪蛋白胨 10．0g 可溶性淀粉 0．5g

酵母浸膏(粉) 5．0g 复合溶液 10ml

葡萄糖 2．0g L－胱氨酸 0．4g

植胨 5．0g 蒸馏水 加至1000ml

纤维二糖 0．2g pH7．4～7．6

磷酸氢二钠 4．0g

(2)复合溶液：维生素K₁、K₃、K₅各20mg，氯化血红素0．05g(先溶于1N NaOH1．0ml)，甲酸钠0．2g，延胡索酸0．2g，辅羧酶4mg，加蒸馏水至1000ml，滤过灭菌备用。

8．放线菌选择性培养基 使用BHI或AN培养基为基础培养基，加入盐溶液或选择剂AS即可。

盐溶液配制：磷酸钾15g，硫酸铵1．0g，硫酸镁0．2g，氯化钙0．01g，加蒸馏水至100ml，加入量为10%。

AS选择剂1、2、3号加1种即可。

AS₁配制：氟化钠25mg，粘菌素1mg，硫酸镉10mg，碱性复红20mg，亚硫酸钾450mg，加蒸馏水至100ml，按10%比例加入。

AS₂配制：苯己醇25ml，万古霉素75mg，加蒸馏水至100ml，按10%比例加入。

AS3配制：0．04%孔雀绿溶液加入0．05g去氧胆酸钠，按1%比例加入。

9．消化链球菌选择性培养基 一般使用PY(G)或AN作为基础培养基，添加PTS选择剂即可。基础培养基中宜加入丙酸钠6%，NaN₃0．01%。

PTS选择剂配制：吖啶橙0．01g，TTC0．1g，0．65%结晶紫1ml，硫酸铊1．65g，加蒸馏水至100ml，按2%比例加入，其中PYG培养基为：

胰酶酪解蛋白 1．0g

蛋白 0．5g

酵母浸膏 1．0g

维生素K 0．1μl

氯化血红素 0．5g

盐酸半胱氨酸 0．05g

氯化钠 0．5g

葡萄糖 0．2g

蒸馏水 100ml

pH7．2

10．消化球菌选择性培养基 可选用AN、庖肉培养基或PYG培养基作基础培养基，添加PS添加剂1%和0．2%苯乙醇即可。PS添加剂配制：结晶紫70mg，粘杆菌素100mg，醋酸铊2g，加水至100ml。添加PC添加液可选择消化球菌和消化链球菌。PC添加液配制：结晶紫70mg，四环素50mg(或粘杆菌素100mg)，NaN30．1g，加蒸馏水1000ml，按1%比例添加。

11．韦荣氏球菌选择性培养基使用VS血平板选择韦荣氏球菌，VS血琼脂为：

胰酶酪解蛋白 8．0g

酵母浸膏 3．0g

硫乙醇酸钠 0．75g

乳酸钠 12．5g

吐温－80 4ml

抗生素复合液 3ml

蒸馏水 加至1000ml

pH7．5

抗生素复合液：0．1%煌绿1ml，1%荚竹桃霉素(或桔黄霉素)3ml混合加入。或用碱性复红0．0002g，万古霉素7．5mg(或链霉素5mg)取代。

12．梭菌选择性培养基CM

胰蛋白胨 17．0g

蛋白胨 3．0g

葡萄糖 6．0g

氯化钠 2．5g

硫乙醇酸钠 1．8g

L－半胱氨酸 0．25g

甲醛次硫酸钾 1．0g

新霉素 0．15g

叠氮钠 0．2g

蒸馏水 加至1000ml

pH7．0

13．产气荚膜梭菌培养基TSH

胰酪胨 15．0g

亚硫酸钠 1．0g

新霉素 0．02g

多粘菌素 0．05g

酵母浸膏 10．0g

枸椽酸铁 0．5g

琼脂 15．0g

蒸馏水 加至1000ml

pH7．2

产气荚膜梭菌形成黑色菌落。

14．难辨梭菌选择性培养基CCFA

胨2号 40．0g

磷酸氢二钠 5．0g

磷酸二氢钾 1．0g

氯化钠 2．0g

无水硫酸镁 0．1g

果糖 6．0g

1%中性红酒精溶液 3ml

蒸馏水 加至960ml pH7．6

灭菌后冷却至50℃时宜加入：

环丝氨酸 3～5mg

头孢甲氧噻吩 160mg

50%蛋黄盐水悬液

(与等量生理盐水混合) 50ml

(或加溶菌酶1mg%)混均后再倾注平皿备用。

15．弯曲菌(螺杆菌)选择性培养基

胰蛋白胨 10．0g

蛋白胨 10．0g

葡萄糖 1．0g

酵母浸膏(粉) 2．0g

氯化钠 5．0g

重亚硫酸钠 0．1g

琼脂 15g

蒸馏水 加至1000ml pH7．2～7．4

高压灭菌冷却至60℃后加入添加剂：

TMP 5mg

万古霉素B 10mg

多粘霉素B 2500u或0．38mg

头孢罗新 15mg

脱纤维羊(或兔) 50ml

两性霉素 2mg

以上介绍的各类培养基都是近年文献介绍的，经笔者试用认为可靠且效果较好，读者可根据自己的条件选用。