锌的测定(双硫腙比色法)
出处：按学科分类—医药、卫生 中国科学技术出版社《食物营养分析实用手册》第41页（2630字）
锌是人及哺乳动物体内必需的一种微量元素，动物性原料是锌的可靠来源，如牛肉、猪肉和羊肉每千克含锌20～60毫克，鱼类和其它海产品含锌在15毫克／千克以上。豆类和小麦虽然含锌15～20毫克／千克，但谷类经加工后，其可食部分的含锌量明显下降，此外，动物性食品中锌的生物有效性优于植物。
纯锌与稀硫酸或盐酸作用缓慢，若锌不纯则作用很快。锌溶于硝酸，也能缓慢地溶于醋酸及果酸。
锌可与很多有机试剂形成有色络合物，根据这个性质，可用于检测痕量锌。
试剂
(1)四氯化碳(分析纯)。
(2)10%柠檬酸钠溶液：溶解10克柠檬酸钠(分析纯)于重蒸水中，并稀释到100毫升，以百里香酚蓝为指示剂，加氢氧化铵至淡蓝色，以0．01%双硫腙的四氯化碳溶液抽提，直到双硫腙层的绿色不变，再以四氯化碳振摇到无色为止，以除去残存的双硫腙。
(3)醋酸缓冲液：混和等量的2N醋酸钠溶液和2N醋酸溶液，同上用双硫腙处理之。
(4)双硫腙溶液：①0．01%的四氯化碳溶液(W／V)
②0．001%的四氯化碳溶液(W／V)。
(5)25%硫代硫酸钠溶液：称取25克硫代硫酸钠(Na2S2O3·5H2O)，溶解于重蒸水中，并稀释到100毫升，同上用双硫腙处理之。
(6)50%柠檬酸铵溶液：称取50克柠檬酸铵(分析纯)，溶于重蒸水中，并稀释到100毫升。同上用双硫腙处理之。
(7)0．1%百里香酚蓝指示剂。
(8)氨水(1∶1)：将浓氨水和等体积的重蒸馏水开口放置于干燥器内平衡一周，取平衡后的重蒸馏水备用(或用市售氨水重蒸馏后备用)。
(9)锌标准溶液(1微克／毫升)：准确称取锌粒(分析纯)0．1克(精确到0．0001克)，用10毫升2N盐酸溶解之，加重蒸馏水稀释到1000毫升，配成100微克／毫升的贮备液(贮存瓶事先用浓硝酸处理后备用)，吸取贮备液1毫升，用重蒸馏水稀释到100毫升。
操作步骤
1．标准曲线的绘制：取7个100毫升分液漏斗，分别加0．0，1．0，2．0，3．0，4．0，5．0，6．0毫升的锌标准溶液，用重蒸馏水补齐至10毫升。各加醋酸缓冲液5毫升，硫代硫酸钠溶液1毫升，准确加0．001%双硫腙溶液30毫升，剧烈振摇3分钟，分层后将下层双硫腙四氯化碳层移入小锥形瓶中，加少量无水硫酸钠脱水后，移入1厘米比色皿内，以空白管调零，于520nm波长下测其光密度。
以光密度为纵坐标，锌含量(微克)为横坐标，绘制标准曲线。
由于标准曲线的重现性差，故于每份试样分析操作中平行作1～2份标准锌(1～5微克)以进行校正。
2．样品处理：称取细碎样品40克于一光滑的瓷蒸发皿内，置电炉上小火蒸干，升温炭化，待烟冒尽后移入500℃马福炉内灼烧至全部变成白色灰烬。如不易烧白，则待冷却后，加入少量硝酸润湿，蒸干后再行灼烧。
将灰分溶于5毫升N盐酸中，在水浴上稍蒸干，移入100毫升容量瓶中，以重蒸水定容至刻度。
3．样品测定：准确吸取样品液5毫升(含锌量少于5微克)，置100毫升分液漏斗中，加重水5毫升，柠檬酸钠溶液5毫升，滴入百里香酚蓝指示剂2滴，以柠檬酸铵溶液〔或用经处理过的氨水(1∶1)〕调节至试液呈淡蓝色(pH8．3)，过量数滴，加入0．01%双硫腙溶液5毫升，剧烈振摇2分钟，静置澄清后将下层分入另一100毫升分液漏斗中，再用少量双硫腙溶液进行提取，每次2～3毫升，直到双硫腙溶液不变色为止。合并上述所得双硫腙液，加入0．02N盐酸20毫升，剧烈振摇2分钟，静置分层后，弃去双硫腙的四氯化碳层，并用少量四氯化碳洗涤提取过的盐酸溶液，以除去残存于酸液中的双硫腙。加入醋酸缓冲溶液5毫升，并准确加入硫代硫酸钠溶液1毫升(pH4．5～5．0)，0．001%双硫腙溶液30毫升，剧烈振摇3分钟，待分层澄清后，将下层分入一小锥形瓶中，加少量无水硫酸钠以除去少量悬浮水珠。用721型分光光度计在520nm波长下，1厘米比色皿，以试剂空白为零，测其光密度。
另取锌标准溶液若干毫升(含锌量少于5微克)，用重蒸馏水稀释至总体积为10毫升，其余操作同上(与上述试样分析平行操作)，测其光密度。
4·计算：
式中：A：标准曲线查得的，并计算出每毫升样品液含锌量(微克)；
C：样品提取液总体积(毫升)；
W：样品重(克)；
1000：换算微克为毫克；
100：换算为百分含量。
W：试样重量(克)。
〔注〕①本法选自部颁标准，它来源于Sandell(1959)，为英、美普遍使用的比色法。
②分析时所用的玻璃器皿均需先用硝酸(1∶1)洗涤，然后再用无离子水冲洗干净。