土壤水解性氮的测定

出处：按学科分类—农业科学 中国农业出版社《果树施肥手册》第194页（2963字）

1．扩散法 方法原理：土壤中可水解的氮素通过碱水解后所产生的氨气(NH₃)，在塑料小圆盒中扩散，被稀硫酸所吸收成硫酸铵，然后在碱性条件下，与纳氏试剂反应，生成溶解度较小的碘化氨基氧化汞的黄棕色溶液或沉淀，NH₄⁺愈多，颜色愈深，与标准色卡比较，即可判断出土壤中水解性氮的含量。

试剂：

①纳氏试剂：配方1：溶解5．0克碘化钾(KI)于5毫升蒸馏水中，又溶解3．5克升汞(HgCl₂)于20毫升蒸馏水中(稍加热溶解)。以氯化汞溶液慢慢倒入碘化钾溶液中，并不停地搅动，直至微红色沉淀不再消失为止。然后加30%KOH(或20%NaOH)溶液70毫升，并不断搅拌，再滴加数滴HgCl₂液至出现红色沉淀为止。

配方2：①称KI7克，HgI10克，溶于少量水中；②另配一碱液：称NaOH16克于50毫升水中，冷却后将①缓缓倒入②液中，边加边搅拌，最后用水稀释至100毫升，静置过夜，取清液贮于棕色瓶中，如发现试剂变黄，应重配。

上述两配方可任选一种。配方2手续较简便，但需用有毒的HgI，配后定要洗手。

②2NH₂SO₄溶液：取27．8毫升浓H₂SO₄(比重1．84)，缓缓地加入到200毫升蒸馏水中，边加边搅拌，冷却后再稀释定容至500毫升。

③20%氢氧化钠溶液：20克NaOH溶于100毫升蒸馏水中，贮于塑料瓶中保存。

④铵态氮标准溶液：准确称取经过80℃烘过3小时后的氯化铵(二级)1．910克，溶于蒸馏水中，加入1毫升氯仿，定容到1000毫升，即为500毫克／千克铵态氮。然后稀释成50毫克／千克，最后稀释成1．0、4．0、8．0、16．0毫克／千克。如无比色卡时可用此系列显色、比色。

⑤土壤标准比色卡：黄色由浅至深表示N含量1．0、4．0、8．0、16．0毫克／千克。

仪器：

①带盖塑料小圆盒：直径约6厘米，高约2．2厘米(也可用其它不漏气的小塑料盒或青霉素瓶、25毫升试剂瓶等代替)。用前仔细检查有无漏气现象，如漏气就不能使用。

②塑料小杯：体积约20～30毫升。也可用白色瓷质或玻璃质酒盅代替)。

测定步骤：

①取相当于干土样0．50克的自然湿土平铺于塑料盒底的周围。另剪与盒盖大小相同的滤纸片，将其紧贴于盒盖内面，纸上滴加入2NH₂SO₄数滴，使纸能贴住盖顶，让碱解出来的氨挥发后被酸吸收。在滤纸上滴加硫酸不能太多，否则在碱解加热过程中，由于水汽在盖顶上凝结，会使纸上含铵液滴落下去而影响结果。

②于盒底中央用滴管迅速加入20%氢氧化钠2毫升，立即盖紧盒盖，勿使漏气。

③将整个塑料盒水平转动，使碱液与土充分接触，然后将塑料盒小心平放于水温为80℃的水面上，令其自然降温，由放入时起计时，经15分钟立即取出。

④打开盒盖，检查盒内碱液是否与土壤充分混合，盖内滤纸是否完好，并有否受碱液浸渍，如果一切正常，就用镊子或玻璃棒将滤纸取下，放入塑料小杯中，用皮头滴管取蒸馏水5毫升，分次洗盒盖，一并倒入小杯中摇匀。

⑤从小杯中吸取稀释液4滴，注入白瓷比色板穴内，加纳氏试剂1滴，与标准比色卡比色，定出铵态氮毫克／千克数。

⑥显色液含氮毫克／千克数乘以10，即得土壤中水解氮含量毫克／千克数。

2．纳氏试剂比色法 仪器：分光光度计、150毫升三角瓶、漏斗等。

试剂：

①纳氏试剂：同扩散法。

②10%酒石酸钾钠溶液：10克酒石酸钾钠溶液溶于水稀释至100毫升。

③提取剂：

a．1N硫酸钠提取剂(酸性土用)：160克Na₂SO₄·12H₂O溶于水，稀释至1升。

b．0．5M碳酸氢钠溶液(碱性和中性土用)：42克NaHCO₃溶于水，稀释至1升，用50%NaOH调节pH至8．5。

④铵态氮标准溶液(200毫克／千克氮)：吸取纯净的氯化铵(NH₄Cl)0．7640克，溶于提取剂中，最后用提取剂稀释至1升。

测定步骤：

①20克土加100毫升提取剂，剧烈振荡3分钟，静置5分钟，过滤。

②对于酸性土的提取液吸5毫升，加10%酒石酸钾钠1毫升，摇匀放置5分钟，再加纳氏试剂1毫升，加水至25毫升，再摇匀放置5分钟，在490纳米波长下比色。

③对于中性和碱性土壤则在吸出4毫升滤液后，先加2N硫酸溶液1毫升，中和溶液中的碱，再照上法加酒石酸钾钠和纳氏试剂比色。

④标准曲线的绘制：从含氮200毫克／千克的标准液中，吸取10毫升，加提取剂至100毫升，即成为含氮20毫克／千克的稀释标准液。然后再吸取20毫克／千克的标液各0、2、4、6、8、10毫升，分别放入100毫升容量瓶中，加提取剂至刻度，此系列标液相应含氮0、0．4、0．8、1．2、1．6、2．0毫克／千克。

将各种浓度的系列标液吸取5毫升(或4毫升)，与待测液同样体积，并同待测液一样显色和比色。

结果计算：

土壤中(毫克／千克)=溶液中NH₄⁺－N(毫克／千克)×5

注意事项：

①的测定中，所有试剂都要用无NH₄⁺的蒸馏水配制。

②加纳氏试剂前应将溶液调至中性，有时可在溶液中加1%阿拉伯胶5滴作为保护剂，黄色稳定时间30分钟内应及时比色。