苹果离体快繁技术
出处：按学科分类—农业科学 中国农业出版社《果树育苗手册》第152页（2254字）
1．外植体接种和起始培养 作为苹果试管繁殖的外植体，主要用茎尖和茎段，茎尖多在早春叶芽刚萌动或长出1～1．5厘米嫩茎时剥取。茎段用新梢先端未木质化或半木质化部分。早春叶芽萌动后，取生长健壮的发育枝中段，流水冲洗尘土后，剪成带单芽的茎段，剥去2～4个鳞片，置于烧杯中，进行表面消毒后，无菌操作条件下剥取茎尖接种于起始培养基上。未萌动的枝条，可在20～25℃条件下水培催芽，待芽萌动后再剥芽切取茎尖接种。若在生长季节，可取长约1．5厘米的梢尖，去掉较大的幼叶，表面消毒后剥取茎尖接种。旺盛生长的新梢，取中上段，不剥芽的鳞片，经表面消毒后，直接接种带有1～2个芽的梢段。外植体接种，全年均可进行，但不同季节外植体的分化能力和表面带菌状况的不同，对接种成败有很大影响。早春嫩梢刚开始伸长时接种较易成功，且分化和增殖快。
起始培养基，以MS为基本培养基，附加BA0．5～1．5毫克／升+NAA0．01～0．05毫克／升+蔗糖30～35克／升，pH5．8。在培养基中附加谷胱甘肽或水解酪蛋白50～100毫克／升，对有些品种的起始培养是有利的。
外植体切取的大小依培养目的而定，用于快繁的，取茎尖较大，一般为0．5～2．0毫米；用于脱除病毒时，取茎尖越小，带病毒越少，脱病毒效果越好，通常切取只带1～2个叶原基的微茎尖进行培养。接种后若有轻微褐化，经过几次的转接可以克服。褐化严重的，需转接到添加抗氧化剂的新鲜培养基上。常用维生素C5．0～10．0毫克／升柠檬酸150毫克／升或盐酸半胱氨酸100毫克／升，也可附加0．2%～2%PVP或活性炭。
2．继代培养 苹果茎尖培养的增殖方式主要是丛生芽块的分割和嫩茎扦插。当丛芽伸长缓慢或生长停止时，将其分割成若干小块，每块有2～3个嫩茎，清除基部多余的愈伤组织，转接到继代培养基上，剪下的茎尖或茎段，长于1厘米时，扦插在培养基中。转接7～10天后，基部分化的侧芽大量萌发，形成新的丛生芽，140天左右，当苗高约5厘米时，便停止生长又可以分割，进而不断增加试管苗数量。
苹果继代培养基以MS为基本培养基，附加BA0．5～1．0毫克／升+NAA或IBA或IAA0．05毫克／升。蔗糖浓度以40～60克／升增殖效果最好。培养条件以25±2℃比较适宜，光照强度1500～2000勒克斯，每天光照14～16小时。
3．生根培养 选用继代转接后35～40天，长2～3厘米的苹果试管嫩茎作为微插条，转接到生根培养基中，进行生根培养，10天左右开始在微插条的基部出现根原基，20～30天根可生长到驯化移栽所需长度。
培养基以MS0．5毫克／升附加生长素即可，无需细胞分裂素。常用生长素及浓度范围：IBA0．2～0．6毫克／升，IAA0．5～2．0毫克／升，NAA0～0．2毫克／升，蔗糖浓度3%为宜，培养条件25±2℃，通常在光照培养下进行，与继代培养的条件相同。而生根比较困难的材料，转接到生根培养基后，先暗培养5～7天可提高生根率。
为了简化操作和节约费用，试管苗可不经过生根培养，直接在试管外进行扦插。李作轩(1983)以砧木M4为试材，在3～7月用IBA1000毫克／升或NAA500毫克／升快速浸沾试管嫩茎，插在新鲜的蛭石上，立即保湿，温度控制在23．0～23．7℃，光照3400勒克斯，pH5．5，生根率可达70%，移栽成活率达95%。
4．驯化和移栽 移栽前适当提高生根培养基中蔗糖浓度(3%～5%)，增加试管苗的碳素营养、积累水平以培育壮苗。选择具有3条以上根、叶大、浓绿、幼茎粗壮，发育充实的试管苗移栽。在生根培养20～25天后，不定根长至1厘米时，将三角瓶移至20～35千勒克斯强光下闭瓶锻炼20天左右，使试管苗幼茎更加充实，发育健壮。闭瓶锻炼后，去除瓶塞继续锻炼2～5天，使叶片适应低湿环境，在培养基表面出现大量杂菌前移栽。
从瓶内取出经过锻炼的生根试管苗，洗净根际的培养基，移栽到营养钵中，置于温度25℃左右，最低大于8℃，最高小于35℃，光照18～20千勒克斯的温室或大棚里，基质应用通气性好、保水力强的材料，如1／2沙壤土加1／2蛭石混合。栽后要覆盖塑料小拱棚，空气相对湿度大于85%，基质水分不可过多。1周后开始逐步揭膜放风，直至完全除去塑料薄膜。过渡移栽30天后，地上部长到10厘米左右，根系生长旺盛时，可移至田间，同时注意防病保苗。试管苗经驯化后可直接向大田移栽，避免低温或高温季节移栽，成活率以春、秋两季最好。春季土温低，栽后浇水不宜过多，以免降低土温，影响苗的生长。秋季(9月)气温和光照都对移栽有利，当年成活的幼苗，可生长到15～20厘米高。在河北中部地区，只要冬季培土防寒，可安全越冬。第二年春天开始生长早，秋后可以达到出圃的要求，在过渡移栽和大田移栽过程中，喷施抗蒸腾剂如0．05～0．1%CaCl2，0．05%～0．1%NaHSO3，降低蒸腾速率，移栽成活率提高。