凝集溶解试验

出处：按学科分类—农业科学 中国农业出版社《兽医微生物实验诊断手册》第208页（1456字）

钩端螺旋体与相应抗体结合时，在高浓度抗体管出现溶菌现象，低浓度管出现凝集现象，称为凝集溶解试验。本法通常用作流行病学调查，以查明该地区所流行的菌型，试验一般先做定性试验，以查明该血清是否含有钩端螺旋体抗体及其型别，然后进一步用所查出的同源抗原作定量试验，以测定凝集溶解效价。

一、材料准备

1．柯索夫培养基 在990ml蒸馏水中，分别加入蛋白胨0．8g，氯化钠1．4g，Na2HPO₄·2H₂O0．96g，KH₂PO₄0．18g，1%氯化钾4．0ml，1%碳酸氢钠2．0ml，1%氯化钙4．0ml，置100℃水浴30min，使充分溶化，滴定pH至7．3～7．4，用滤纸过滤后，每管以9ml(或4．5ml)的量分装试管，10磅30min灭菌，培养基应完全透明，无沉淀物。冷却后每管加入无菌的兔血清1ml(或0．5ml)，培养2日，无菌后保存备用。

2．抗原 必须以活菌作抗原，将14个群的标准菌株分别接种于含10%兔血清的Korthof培养基中，在28～30℃培养5～7天，用400倍暗视野显微镜检查，若菌数达每视野40条以上，形态典型，运动活泼，无自凝现象，即可用作抗原。

3．被检血清 按常规方法采血，提清血清，血清必须保持新鲜。

二、定性试验

用生理盐水将被检血清作25×稀释，加入微量滴定的小孔中，上排14个孔，每孔0．1ml，下排14个孔，每孔加生理盐水0．1ml，然后将14个菌型的活菌抗原分别加入14个孔中，上下二排各0．1ml，混和后，置28～30℃作用2～4h，由每孔取出1滴干载玻片上，加盖玻片，在150～200倍暗视野显微镜下观察。

若见螺旋体凝集呈蜘蛛状，并逐渐溶解，为凝溶阳性。上排孔出现凝溶反应，下排为阴性者，即可判定该血清中含有该型钩端螺旋体的抗体。

三、定量试验

被检血清用生理盐水自50×开始倍比稀释至第9孔(12800×)，每孔0．1ml，第10孔不加血清为菌液对照，然后加入同型抗原，每孔0．1ml，同上法放置一定时间后观察结果。

反应程度用下列符号记录。

++++：几乎全部菌体发生溶解、破坏或变型，间有极少，单个菌体，或大小不等的点状、块状残余。

+++：大多数菌体被凝集，呈团状或蜘蛛状，仅有少数菌体游离，运动不活泼，折光率低。

++：半数菌体被凝集，呈蜘蛛状或块状，块边沾有活动菌体。

十：仅少数菌体凝集，大部菌体游离。

-：菌体正常、分散，无凝块，菌数与对照相同。

被检血清出现++以上的最大稀释倍数为该血清的凝溶价，马血清凝溶价在800×以上者判为阳性，400×为可疑；其他家畜400×为阳性，200×为可凝，如第一次效价虽然不高，但隔一周后采血重检，效价较第一次提高4倍者，也判为阳性。