梭杆菌属

出处：按学科分类—农业科学 中国农业出版社《兽医微生物实验诊断手册》第386页（2700字）

系革兰氏阴性、无芽孢、专性厌氧菌，化能有机营养，不运动。代谢蛋白胨或碳水化物的主要产物为丁酸，常含有乙酸、乳酸以及少量的丙酸、琥珀酸、甲酸和己醇，不产生异丁酸或异戊酸。

DNA中G+C的克分子比为26～34，个别种为52～57。

本属包括10个种，其中与动物疾病有关者主要是坏死梭杆菌。

坏死梭杆菌为绵羊腐蹄病的主要病原菌，也可引起其他偶蹄动物的蹄部感染和多种器官的化脓病变。在犊牛坏死性咽炎、幼畜的脐带感染中常分到此菌，它还引起火鸡肝脏的肉芽肿，使多达20%的火鸡肝报废。

1．样品采集 蹄部材料采集同节瘤拟杆菌，内部器官和其他组织病料的采集，应尽量采用无菌操作，将采集到的病变组织、脓汁、渗出液等置灭菌容器或试管中，并充满CO₂，密闭，送检，或将材料置运输培养基中送检。运输培养基只作运输材料用，不能用它来保存材料。

病料中可能有需氧菌或兼性厌氧菌，若繁殖、增多，将增加分离困难，故应注意厌氧操作。

2．涂片镜检 系革兰氏阴性梭形杆菌，病料涂片中的菌体两端微圆。肉汤培养物则常呈丝状，宽常为0．5～0．7μm，最宽可达1．8μm；长度差异很大，球杆菌仅为1～2μm，中等长度的为10μm左右，最长的可达80μm。老龄液体培养物和固体上的生长物则呈杆状，有些菌体呈颗粒样着色。病料涂片中可见多种形态，可能是本菌的多形性，也可能是存在多种病原菌，故分离时应挑选不同形态的菌落，不可只选典型菌落。

3．分离培养 被检材料在鲜血琼脂、卵黄琼脂、PYG琼脂、或加有5～7%鲜血的蹄粉培养基上划线，同时接种熟(疱)肉基或肉肝汤。此类专性厌氧菌需严格的厌氧条件和技术，所以能有厌氧操作箱更好。培养基需用新鲜制备的(旧培养基含O₂量较多)，消毒后或加热过或加鲜血后即接种，并迅速放入含有催化剂的厌氧培养系统中，封闭后抽气，灌入含有H₂10%、CO₂90%的混合气体，重复操作3次，使空器内达到无O₂环境，于37℃下培养。此菌如生长，菌落为1～2mm大小，圆形，边缘锯齿状或花边状，隆起或呈纽扣状。菌落表面不平，呈错综的嵴状。透明或半透明，用透射光观察，中央不均匀呈镶嵌状结构。在兔血平板上大多数菌株呈α型或β型溶血，β溶血的菌株在卵黄琼脂上表现的脂酶反应通常为阳性，α溶血或不溶血的菌株脂酶反应则为阴性。不产生卵磷脂酶。

在葡萄糖肉汤中生长浑浊，有光滑絮状颗粒或大量沉淀物。乳糖或葡萄糖肉汤的最终pH为5．6～6．3，麦芽糖肉汤中的最终pH多与上同，但有的为5．8～5．9。

4．生化反应 PYG中的产物主要是丁酸及少量的丙酸、乙酸，或有微量的乳酸、琥珀酸，产气。七叶苷不水解。产生吲哚。20%胆汁中反应不定，或生长良好或不生长。多液化明胶。多使牛乳凝固、胨化。多能消化碎肉。常用的糖均不产酸(指pH在5．7以下)，只有果糖或葡萄糖有时例外。PYG琼脂中大量产气，可将琼脂冲裂甚或冲向顶部。

菌体可凝集人、家兔、豚鼠的红细胞，但不凝集牛、羊的红细胞。根据分离物的溶血否和凝集红血球的能力，可将此菌分为三型，A型溶血，凝集血细胞，对小白鼠有致病性；B型溶血，不凝集血细胞，对小白鼠致病性低或无；C型不溶血，不凝集血细胞，对小白鼠无致病性。A型从动物分得，B型和C型多从人分得。

斯图尔特(Stuart)运输培养基不供细菌生长用，而是供运输含厌氧菌的送检材料用。此培养基含保护剂、还原剂、吸氧剂，还有指示含氧量多(蓝色)少(无色)的指示剂美蓝，其配制法为甘油磷酸钠10g，盐酸半胱氨酸0．5g，硫乙醇酸钠0．5g，氯化钙0．1g，亚甲蓝(即美蓝)0．001g，琼脂5g，蒸馏水1000ml，高压灭菌，盛于密闭的试管、玻瓶中以供应用。用前如发现已成蓝色，可置水中煮沸片刻至无色为止。若煮后仍是蓝色或淡蓝色，则不能应用。如不想将送检材料放于含琼脂0．5%的半固体中，可增大琼脂量达2%，使成固体，将送检材料置于其上运输。

蹄粉培养基制法为取牛肉膏(meat extract，肉浸出物)0．5g，蛋白胨1g，酵母膏(即酶母浸出物)0．2g，氯化钠0．5g，蹄粉2g，琼脂1．5g，蒸馏水100ml，pH7．4，高压灭菌。

蹄粉制备系将蹄壳洗净，粉碎，在37℃干燥4天，用磨碎机磨成粉。

PYG培养基为取蛋白胨20g，酵母膏10g，葡萄糖10g，半胱氨酸0．5g，刃天青溶液4ml(刃天青11g溶于44ml蒸馏水中)，盐溶液44ml(盐溶液的配制法为取CaCl₂0．2g，MgSO₄0．2g，K₂HPO₄10g，KH₂PO₄1g，NaHCO₃10g，NaCl2g，蒸馏水1000ml。先将CaCl₂、MgSO₄溶于300ml蒸馏水中，溶解后再加500ml蒸馏水，将其余盐类加入，使其完全溶解后，再加200ml蒸馏水，混匀，保存于普通冰箱备用)。

将各物加于1000ml水中，混匀，调pH至7．4，分装于有螺帽或橡皮塞的15mm×150mm试管中，每管7ml，121℃高压15min，冷后置厌氧罩内(箱内环境为N₂85%，H₂10%，CO₂5%，无氧)半天，拧紧螺帽或橡皮塞，从罩内取出，置普通冰箱保存待用。

未接种的PYG培养基只含极微量的挥发性或不挥发性有机酸，接种对照培养物后应呈现典型的气相色谱曲线：即脆弱拟杆菌产生多量的琥珀酸及乙酸，少量的丙酸及苯乙酸，还有少量的异戊酸、异丁酸及乳酸；坏死梭杆菌产生多量的丁酸，少量的丙酸及乙酸，或还有少量的乳酸、琥珀酸；魏氏梭菌(Clostridium welchii，即Cl．perfringens)产生多量的乙酸、丁酸、乳酸，或有少量的丙酸、甲酸、琥珀酸。