犬细小病毒

出处：按学科分类—农业科学 中国农业出版社《兽医微生物实验诊断手册》第603页（1399字）

本病毒是猫细小病毒的一个亚种，引起犬出血性腹泻、心肌炎和肺炎，在幼犬中的发病率和病死率均很高。

一、样品采集

发病早期的病犬粪便。

二、病毒分离

(一)细胞培养 将粪便离心除去残渣后，加入高浓度的抗生素，或再以10000r／min离心30min，取上清液接种原代或次代犬胎肾或猫胎肾细胞培养。病毒虽能在细胞内生长良好，但无明显CPE。有时出现细胞皱缩，常形成核内包涵体。病毒必须在细胞分裂旺盛期接种。鉴定感染细胞的最简便方法是用荧光抗体着染培养3～5天的细胞单层或测定培养液的血凝性。

(二)动物试验 可用病犬粪便提取物(即粪便加适量的PBS稀释后与等体积氯仿一起振荡10min，3000r／min离心25min，所得的上层水相液)或小肠乳剂口服或肌注2月龄幼犬。

三、血清学试验

(一)HA和HI试验 可取发病早期的病犬粪便检测其HA抗原，也可取发病后期的病犬粪便或血清检测其HI抗体。对临床可疑病犬，不论粪便样品还是血清样品，若其HA和HI测定结果有一项为阳性，即可确诊。具体方法如下。

1．粪便样品HA效价测定：取粪便提取物0．2ml，加等量0．2mol／L2-巯基乙醇，37℃作用90min，以破坏可能存在的IgM抗体。然后，在微量血凝板上将其稀释成相同的2列。于第一列的每孔加1滴稀释液(0．015mol／L PBS，pH7．0)，于第二列的每孔加1滴8个单位的犬细小病毒HI抗体，混匀后，37℃感作30min，每孔再加2滴1%猪红细胞悬液，混匀，4℃静置60min后判定。

判定标准是以50%血凝为终点。第一列凝集终点比第二列高2孔以上者，判为阳性。

2．粪便样品IgM性HI抗体效价测定：将2-巯基乙醇处理(方法同上)前、后的粪便提取物各稀释成一列，然后每孔加1滴8单位HA抗原混匀，37℃感作30min，每孔再加2滴1%猪红细胞悬液，混匀后，4℃下60min后判定。

判定标准以红血球完全不凝集为抑制终点。2-巯基乙醇处理后的抑制终点比处理前低2孔(4倍)以上者，判为阳性。

3．血清样品IgM性抗体效价测定：取灭活的待检血清二份各0．2ml，分别加等量稀释液和2-巯基乙醇，37℃作用90min，即为2-巯基乙醇处理前、后的血清样品，以下操作和判定同2．。

(二)免疫荧光和免疫酶技术 可用荧光抗体着染细胞培养以鉴定有无病毒感染，也可检查冰冻切片。用免疫酶着染甲醛固定的组织切片，以检测组织中的病毒抗原。

(三)免疫电镜 是一种快速而特异的诊断方法。取0．2ml粪便提取物与等量免疫血清混合，25～30℃作用1h，滴于铜网上作负染后进行电镜观察，可见大量堆聚一起的直径约20nm圆形和六边形的病毒子。