狂犬病病毒属

出处：按学科分类—农业科学 中国农业出版社《兽医微生物实验诊断手册》第726页（1772字）

本属成员中对兽医重要者只有狂犬病病毒。

狂犬病病毒(Rabies virus)最常见的易感动物是狗，猫、牛、猪被感染的报道也屡见不鲜。感染狗的潜伏期通常为15天至5个月，亦可长达一年。临床症状表现为狂暴型或沉郁型，于晚期出现循环中和抗体。

一、样品采集

无菌取疑似狂犬病动物尸体的延脑、海马回、脊髓和唾液腺。样品要冷藏，运送容器必须牢固。

二、注意事项

1．疑似病畜如不能安全捕抓，可用麻醉弹麻醉后捕获。

2．取样过程中，一旦发生咬伤或创伤，应立即用肥皂水彻底洗涤几分钟。伤口深部用1／500的苯甲烃烷清洗，并在医生的监护下立即注射抗血清或疫苗。

3．取样后的尸体立即焚毁。

三、显微镜检查

1．切取海马回(牛和猫用小脑)，制成压印标本(也可制成组织切片)。

2．室温自然干燥。

3．将已固定或未经固定的标本滴加Seller氏染色液，5～10s后用蒸馏水冲洗，干后镜检。

4．检查包涵体。狂犬病毒包涵体——内基氏小体(Negribodies)存在于神经细胞浆内，嗜酸性(樱桃红色)，其中常可见到嗜碱性(蓝色)小颗粒。胞核呈深蓝色，神经细胞浆呈蓝紫色，间质呈粉红色，神经纤维呈桃红色，神经鞘不着色，红细胞呈橘红色。内基氏小体呈梭形，圆形或椭圆形，大小悬殊。

镜检到内基氏小体即可确诊。除狗外，其他动物检出率低，最好再进行动物接种试验。

四、病毒分离

(一)细胞培养 BHK-21细胞对狂犬病病毒很敏感，应用最广，但不一定产生明显的CPE。细胞单层接种脑组织悬液的离心上清液，于36℃培养，逐日观察CPE。并用盖片培养作免疫荧光和包涵体检查。有时须盲传几代才能看到CPE。

(二)动物试验

1．将大脑皮质、海马回、小脑、延髓和颌下腺等样品混合，研磨成细糊状。用pH7．2的磷酸缓冲液或汉克氏液稀释成10～20%的悬液。

2．低速离心10min。

3．取上清，每毫升加青霉素1000LU和链霉素1000μg，以0．03ml／只剂量脑内接种3周龄小白鼠或乳鼠，每份样品至少接种10只。

4．逐日观察至30天。接种5日内死亡者应视为非特异性。临床症状通常在8～16天出现，表现为麻痹、虚脱和后肢失去平衡等。取鼠脑作内基氏小体或免疫荧光检查。也可于第5、7日各剖杀小鼠检查。

五、血清学试验

(一)免疫荧光试验

1．取样品制成压印片，以冷丙酮固定。细胞培养则用盖玻片培养。

2．狂犬病荧光抗体分别用正常鼠脑和狂犬病病毒感染鼠脑组织吸收。

3．待检压印片分别用经处理的荧光抗体染色，镜检。

4．阳性判定。用正常鼠脑吸收者显示特异性荧光，而用感染鼠脑吸收者则无。

(二)中和试验 将待检样品作10^-1～10^-7系列稀释，分别与抗血清或正常血清等量混合，脑内接种几组小白鼠。如抗血清组被保护，正常血清组发病，则说明样品中有狂犬病病毒存在。

总的讲，内基氏小体检查和动物接种试验是狂犬病实验室诊断的简捷方法。