冠状病毒科

出处：按学科分类—农业科学 中国农业出版社《兽医微生物实验诊断手册》第719页（3346字）

本科为单股RNA病毒，核衣壳螺旋形对称。病毒子多形，平均大小为75～160nm，具有囊膜及棒槌状纤突，长约12～24nm。冠状病毒对乙醚和氯仿敏感，对pH3的稳定性则因毒株而异。某些毒株具有血凝性。病毒不使细胞产生包涵体，在某些种类可导致合胞体形成。

本科目前仅冠状病毒属一个属，根据抗原性可将已知的重要冠状病毒分为五组，详见表46-1。

表46-1 冠状病毒的血清群

一、鸡传染性支气管炎病毒(Infectious bronchitis virus， IBV)

本病毒用中和试验可分为8～10个血清型，且有为数众多的变异株，不同日龄的鸡均易感，但5周龄以下危害最剧，致死率可达40～90%。

(一)样品采集 在潜伏期或急性发病期采集肺组织或鼻液。病料的采集不能迟于感染后3周。采集血清检测抗体。

(二)病毒分离 将肺组织剪碎，浸泡在含有青、链霉素(各1000IU／ml)的PBS中，室温(22℃)下静置1～2h，然后1500r／min离心30min，收取上清供接种之用。

1．细胞培养 可用鸡肾细胞培养，病毒可产生细胞病变。

2．鸡胚接种 本法最为常用，通常接种9～11日龄的鸡胚尿囊腔。

(1)将经处理的肺组织上清液接种鸡胚6枚，各0．1ml。

(2)37℃培养6天，每日检查，2～5天内死亡胚体表现为典型的侏儒化及严重扭曲者，可视为阳性结果。如6天内鸡胚不死，需盲传继代。

(三)血清学试验

1．荧光抗体技术 采集感染后1～7天的病鸡支气管组织作抹片，此法可检出病毒的存在。

2．中和试验 可在鸡胚或细胞培养中进行。在流行或康复期，鸡群可用本法来检测抗体。亦可检测卵黄抗体以确定鸡群的免疫状态。通常以当地流行的毒株作抗原。中和抗体在感染后2周开始出现，一年半仍可测出高滴度的抗体。

3．ELISA试验 此法敏感性较高，亦可用于检测抗体。

4．琼脂扩散试验 此法用于检测抗体，但敏感性较差。与ELISA法一样，不能检测血清型的差异。通常在感染2～3周后产生沉淀抗体，5～6周达最高滴度，约8周后消失。

二、牛冠状病毒(Bovine coronavirus，BCV)

本病毒只有一个血清型，各种年龄的牛均可感染，但5～21天的犊牛最为易感。致死率可达20%。此外，在人和多种动物都有相当高的抗体阳性率。

(一)样品采集 在发病早期或潜伏期采集牛粪，病死动物可采集肠粘膜。

(二)病毒分离

1．细胞培养 一般难以成功。可试用牛胚肾或牛胚睾丸原代细胞，亦可试用HRT-18细胞系。旋转培养较静置培养为佳。盲传数代后，可产生细胞病变，并用大鼠或小鼠红细胞作血吸附试验。

2．实验动物 细胞适应毒脑内或皮下注射初生小鼠，感染乳鼠出现神经症状而死亡。

(三)血清学试验

1．血凝-血凝抑制试验 将腹泻牛粪用生理盐水作1∶5稀释，高速离心，收取上清，从1∶100开始对倍稀释，用大鼠或小鼠的1%红细胞悬液，作微量血凝试验。1∶200以上出现血凝者可初步判定为阳性，进而再用牛冠状病毒的高免血清作血凝抑制试验。

2．免疫电镜 取新鲜牛粪离心后的上清液及牛冠状病毒的高免血清各一滴，混合滴加在琼脂上，上覆包被炭膜的铜网，待滴加液完全渗入琼脂后，即可取出铜网负染作电镜检查。

3．中和试验 常用微量中和试验以检测抗体。但抗体的存在只能说明感染，不一定与发生腹泻有关。

4．ELISA试验 与中和试验相同，用于检测抗体。

三、猪传染性胃肠炎病毒(Transmissible gastroenteritis virus，TGEV)

本病毒只有一个血清型，与犬冠状病毒及猫传染性腹膜炎病毒有亲缘关系。各种年龄的猪均易感，但以新生仔猪为最甚，致死率可达100%。除猪以外，犬、猫及狐狸也可感染，但无临床症状。本病毒定位于空肠和回肠绒毛上皮细胞，也能在肺巨噬细胞中增殖并长期存在。本病的传播途径主要通过直接接触以及气雾。病毒还能在蝇体内增殖。

(一)样品采集 在发病初期采集粪便，病死仔猪采小肠粘膜。病料保存应低于-20℃。

(二)病毒分离

1．细胞培养 可用猪甲状腺原代细胞或PD-5细胞系，还可用猪肾或猪唾液腺原代细胞，将小肠内容物的离心上请接种细胞，盲传数代直至出现细胞病变。但个别野毒株无细胞病变。

(三)血清学试验

1．荧光抗体技术 此法用于检测病毒，可取急性患病期的仔猪宰杀，取其小肠作冰冻切片，作直接或间接荧光染色。

2．免疫电镜 方法同牛冠状病毒的免疫电镜。或用固相免疫电镜(SPIEM)，即先用一滴葡萄球菌蛋白A(20μg／ml)滴加在包有炭膜的铜网上，作用20min，洗涤，滴加1∶4000高免血清一滴，室温30min，洗涤，最后加待检粪悬液上清，作用1h，洗涤后镜检。

3．中和试验 一般在初次临床症状出现后14-21天采血供检测抗体之用。

5．ELISA试验 用于检测抗体，此法比中和试验敏感。

四、猪流行性病毒性腹泻病毒(Epizootic viral diarrhea virus， EVDV)

本病毒与猪传染性胃肠炎病毒都引致猪腹泻，凭症状无法区别，曾将两者混为一谈，后称类冠状病毒因子，现通称为猪流行性病毒性腹泻病毒。本病毒与其他冠状病毒均无亲缘关系，就目前所知，只有一个抗原型。病毒在小肠绒毛上皮细胞及肠腺细胞中增殖。

本病毒不能适应鸡胚和实验动物，细胞培养极为困难。

血清学试验可用电镜或免疫电镜和荧光抗体技术。

五、其他

猪血凝性脑脊髓炎病毒(HEV)引致仔猪呕吐和消瘦，并可引致脑脊髓炎。本病毒可用鸡红细胞作血凝及血吸附试验。病毒分离可用鼻拭液接种猪甲状腺或猪肾原代细胞，前者较易产生细胞病变。

猫传染性腹膜炎病毒(FIP)感染在家猫中广泛存在，但一般呈散发型，幼猫及公猫较易发病，病猫通常死亡。除家猫外，还感染其他猫科动物。诊断主要是取病变器官作冰冻切片，作荧光抗体检查。在猫还有肠炎型冠状病毒(FECV)感染，引致幼猫腹泻，可从粪便中检出病毒。