马传染性贫血琼脂扩散试验操作技术
出处：按学科分类—农业科学 农业出版社《动物检疫手册》第178页（1887字）
(一)各种溶液的配制
1．pH7．4的0．01M磷酸缓冲生理盐水(PBS)：
磷酸氢二钠(12H2O) 2．9克
磷酸二氢钾 0．3克
氯化钠 8．0克
无离子水或蒸馏水加至 1000毫升
2．pH8．6硼酸缓冲液(BBS)：
四硼酸钠 8．8克
硼酸 4．65克
无离子水或蒸馏水加至 1000毫升
3．硫柳汞溶液
硫柳汞 1克
无离子水或蒸馏水 1000毫升
4．琼脂写字墨水：
(1)1克碱性复红溶于15毫升96%酒精中。
(2)2克鞣酸溶于15毫升沸水中。
(1)与(2)混合即成。
(二)琼脂板的制备
1．称取琼脂糖1克，直接放入含有万分之一硫柳汞的100毫升的PBS或BBS中，用隔水浴融化混匀。
2．将直径90毫米的平皿放在水平台上，每平皿到入热融化琼脂糖液15－18毫升，厚度约2．5毫米左右，冷凝后加盖，把平皿倒置，放普通冰箱中可保存两周左右。
3．反应孔现用现打，按7孔图型打孔。外周孔径为6毫米，中央孔径为4毫米，孔间距3毫米。
(三)标准抗原 检验用抗原为马传贫琼扩抗原。
(四)血清
1．检验用标准阳性血清：能与标准抗原在12小时内产生明显致密的沉淀线的传贫马血清，做8倍以上的稀释仍保持阳性反应者为宜。
2．受检血清：来自受检马匹的不腐败的血清，勿加防腐剂和抗凝剂。
(五)抗原及血清的添加 孔型制完用毛笔粘琼脂写字墨水在琼脂板上端写上日期及编号等。在7孔型的中央孔加抗原，2、5孔加检验用标准阳性血清，其余1、3、4、6孔分别加入受检血清，加至孔满为止。平皿加盖，放入铺有数层湿纱布的带盖搪瓷盘中。置15－30℃条件下进行反应，逐日观察3天并记录结果。
(六)判定
阳性：当检验用标准阳性血清孔与抗原孔之间只有一条明显致密的沉淀线时，受检血清孔与抗原孔之间形成一条沉淀线；或者阳性血清的沉淀线末端向毗邻的受检血清的抗原侧偏弯者，此种受检血清判定为阳性。
阴性：受检血清与抗原孔之间不形成沉淀线，或者标准阳性血清孔与抗原孔之间的沉淀线向毗邻的受检血清孔直伸或向受检血清孔侧偏弯者，此种受检血清为阴性。
疑似：标准阳性血清孔与抗原孔之间的沉淀线末端，似乎向毗邻受检血清孔内侧偏弯，但不易判断时，可将抗原稀释2倍、4倍、6倍、8倍进行复试，最后判定结果。观察时间可延至5天。
在观察结果时，最好从不同折光角度仔细观察平皿上抗原孔与受检血清孔之间有无沉淀线。为了观察方便，可在与平皿有适当距离的下方，置一黑色纸如黑卷皮等，有助于检查。
判定时要注意非特异性沉淀线。例如当受检马匹近期注射过组织培养疫苗的乙型脑炎疫苗等，可见与检验用标准阳性血清的沉淀线末端不是融合而为交叉状，以及两个血清间产生的自家免疫沉淀线等。