酸水解法

出处：按学科分类—农业科学 农业出版社《土壤农化分析手册》第594页（1795字）

(一)适用范围 淀粉在稀酸(1%HCl)作用下，水解成糊精和麦芽糖，最后转化成葡萄糖，然后测定葡萄糖，推算淀粉含量。本法较快速，但在酸水解淀粉同时，某些多糖也可同时水解，故适于一般的测定。要求严格时可用酶水解法。

(二)试剂配制

(1)10%NaOH。

(2)饱和Na₂SO₄。

(3)甲基红指示剂。

(4)1%HCl：23ml浓HCl加水至1L。

(5)10%中性Pb(OAc)₂：100gPb(OAc)₂溶于1L水中，过滤。

(6)I₂－KI溶液：2gKI溶于5m1水中，再加入1gI₂，加水至1L，保存于棕色瓶中。

(三)测定步骤 称取风干磨细并通过60目筛的样品1．000－2．000g(如含脂肪多的样品，则须预先脱脂)，放入250ml三角瓶中，加入1%HCl150ml，用具有长玻管的塞子塞紧，在沸水浴上加热(也可放入105℃烘箱中代替)，加热过程中须不时摇动，并注意三角瓶内的液面须浸入沸水中，同时切勿使三角瓶底直接接触水浴锅底，以免跳动或样品焦化。经过3－4b后，取出试液少许，检查是否水解完毕。其作法是：用皮头滴管吸取少许带固体颗粒的悬液，放在白瓷板上，加2滴I₂-KI溶液，如固体颗粒不显蓝色，红色或紫色，说明水解已完全。所取溶液须无损地倒回三角瓶中，并用少量水冲洗滴管，洗液全部收集在三角瓶中(也可于玻片上用低倍显微镜观察其颜色)。如水解不完全，应继续加热半小时后再进行检查，直到水解完全为止。

水解结束后，冷至室温，加入甲基红3－4滴，用10%NaOH中和至微黄色为度。然后逐滴加入10%中性Pb(OAc)₂约5－10ml，以沉淀蛋白质。静置片刻，待上部清液澄清后，再加入几滴Pb(OAc)₂溶液，检查蛋白质是否沉淀完全。继续滴加Pb(OAc)₂溶液直至无白色絮状沉淀产生为止。

将水解液过滤入250ml容量瓶中，用水洗涤三角瓶和沉淀数次，滤液全部收集于容量瓶中，加水定容。

用吸管吸取50ml清液于100ml容量瓶中，逐滴加入5－7ml饱和Na₂SO₄溶液，以除去过量的醋酸铅，至不再产生白色PbSO₄为止，加水定容后过滤。此即由淀粉水解而得到的葡萄糖溶液。可吸取适当量，用二十七章的别尔特朗法、铜还原直接滴定法测定其中还原糖，然后推算淀粉含量。

(四)结果计算

淀粉单元式量为162．1，葡萄糖分子量为180．1，两者之比为0．9；

如果吸取测定的葡萄糖液为10ml，则上式中取用量倍数为：

(五)注释

①在沸水浴上加热时用具有长约50－60cm玻管的塞子，塞三角瓶，为使溶液浓度在加热过程中不改变，加热蒸发的水，可由空气冷凝后滴返瓶中。

②酸水解结束后，用10%NaOH调pH此时不可加入过量的碱，因单糖在碱性条件下易分解。且在加入Pb(OAc)₂沉淀蛋白质时会形成糖的铅盐沉淀。

③注意在近中性溶液中，用Pb(OAc)₂沉淀蛋白质时也可能产生氢氧化铅的白色沉淀，必须与微带黄色或白色的絮状、较轻、悬浮在溶液中的蛋白质沉淀区分开。Pb(OH)₂的白色沉淀则较细、较重，能迅速地沉淀下来。

④过量的Pb(OAc)₂对下步测定有碍，必须除去，但如不立即测定还原糖，则可暂不除去铅，因为铅离子可以防腐。