油菜籽、植株和土壤中残留量检测方法
出处：按学科分类—农业科学 中国农业出版社《农药残留量实用检测方法手册第3卷》第449页（4341字）
中国科学院上海昆虫研究所 徐乃旭 陈问达
油菜籽和土壤样本用甲醇／硫酸铜水溶液提取；植株样本用甲醇／水溶液提取。经三氯甲烷液-液分配和活性炭／硅藻土柱层析净化，液相色谱法(UV)测定烯草酮。
油菜籽和土壤样本用甲醇／硫酸铜水溶液浸渍提取，三氯甲烷萃取；植株样本用三氯甲烷提取。活性炭／硅藻土和弗罗里硅土／硅藻土柱层析净化，气相色谱法(FPD-S)测定代谢物DME-OH。
1．主要仪器及设备
气相色谱仪 火焰光度检测器(FPD-S)
高压液相色谱仪 紫外检测器(UV)
旋转蒸发器
大容量离心机
玻璃层析柱 Φ15mm×180mm
2．主要试剂
甲醇(重蒸或HPLC纯)、丙酮(重蒸)、石油醚(重蒸)、三氯甲烷(重蒸)、乙酸乙酯(重蒸)、盐酸、氯化钠、无水硫酸钠、硫酸铜、氢氧化钠、活性炭(黑色无定形粉末)、弗罗里硅土、硅藻土(100～120目)
烯草酮标准品、DME-OH标准品
3．检测步骤
3．1 提取
3．1．1 烯草酮的提取
3．1．1．1 油菜籽
称取50g样本，加入50mL0．5mol／L硫酸铜溶液、10g硅藻土和150mL甲醇浸泡过夜，过滤。再用100mL50%甲醇溶液洗涤残渣后过滤，合并滤液。
3．1．2 植株
称取20g样本，加入100mL50%甲醇水溶液，组织捣碎后倒入烧杯中。用50mL50%甲醇溶液洗涤残渣后并入玻璃烧杯中，加入100mL0．25mol／L氢氧化钠搅拌后过滤。再用100mL0．1mol／L氢氧化钠溶液洗涤残渣后过滤，合并滤液。
3．1．3 土壤
称取50g土壤样品，加入20mL0．5mol／L硫酸铜溶液和80mL甲醇浸泡过夜。过滤，用50mL50%甲醇溶液洗涤残渣过滤，合并滤液。
3．1．4 DME-OH的提取
3．1．4．1 油菜籽
同烯草酮的提取。
3．1．4．2 植株
称取20g植株样本，加入100mL三氯甲烷，组织捣碎，过滤。用50mL三氯甲烷洗涤残渣后过滤。合并滤液并经无水硫酸钠干燥收集，用旋转蒸发器减压浓缩至3mL左右，待柱层析净化。
3．1．4．3 土壤
同烯草酮的提取。
3．2 净化
3．2．1 烯草酮的净化
3．2．1．1 液-液分配
油菜籽滤液中加入150mL蒸馏水和2mL6mol／L盐酸；植株滤液中加入4mL6mol／L盐酸；土壤滤液中加入80mL蒸馏水和2mL6mol／L盐酸。用50mL×3三氯甲烷萃取，合并三氯甲烷相(如萃取后不能分相可用离心分离)。用10mL0．5mol／L氯化钙和50mL1mol／L氢氧化钠反萃取两次。合并水相，用100mL石油醚洗涤1次，弃去石油醚相。向水相中加入2mL6mol／L盐酸，用30mL、30mL、20mL三氯甲烷萃取3次。合并三氯甲烷萃取相，经无水硫酸钠干燥后，用旋转蒸发器减压浓缩至3mL左右，待柱层析净化。
3．2．1．2 柱层析净化
层析柱中依次装入2cm无水硫酸钠、5g活性炭／硅藻土(1∶4，W／W)和2cm无水硫酸钠。用150mL三氯甲烷预淋。将上述浓缩液移入层析柱中，用5mL三氯甲烷洗涤容器用于淋洗并弃去。用35mL三氯甲烷洗脱并收集，用旋转蒸发器浓缩至近干，加入3mL甲醇继续浓缩至近干。用甲醇定容，待测。
3．2．2 DME-OH的净化
3．2．2．1 液-液分配
油菜籽滤液中加入150mL蒸馏水和2mL6mol／L盐酸，用50mL×3三氯甲烷萃取。合并三氯甲烷相，用旋转蒸发器减压浓缩至3mL左右，待柱A净化。
土壤滤液中加入80mL蒸馏水和2mL6mol／L盐酸。用50mL×3三氯甲烷萃取。合并三氯甲烷相，用旋转蒸发器减压浓缩至3mL左右。加入3mL×215%乙酸乙酯石油醚溶液继续浓缩至近干，待柱B净化。
3．2．2．2 柱A净化
层析柱中依次装入2cm无水硫酸钠、5g活性炭／硅藻土(1∶4，W／W)和2cm无水硫酸钠，用50mL三氯甲烷预淋。将油菜籽和植株的三氯甲烷浓缩液移入层析柱中，用5mL三氯甲烷洗涤容器并淋洗柱子，流出液弃去。再用35mL三氯甲烷洗脱并收集，用旋转蒸发器减压浓缩至近干，加入3mL×215%乙酸乙酯石油醚溶液继续浓缩至近干，供柱B净化。
3．2．2．3 柱B净化
层析柱中装入2cm无水硫酸钠，然后依次加入50mL石油醚、5g弗罗里硅土、1g硅藻土和2cm无水硫酸钠。将石油醚液面降至柱顶，将柱A的洗脱浓缩液移入层析柱中。先后用50mL15%乙酸乙酯石油醚溶液和20mL50%乙酸乙酯石油醚溶液淋洗，流出液弃去。再用30mL50%乙酸乙酯石油醚洗脱并收集，用旋转蒸发器减压浓缩至近干，加入3mL甲醇继续浓缩至近干，用三氯甲烷定容，待测。
3．3 定量测定
3．3．1 液相色谱法测定烯草酮
检测器 UV，255nm
色谱柱 μBONDAPAKTMC18，Φ3．9mm×30cm不锈钢柱
流动相 乙腈／蒸馏水／醋酸(343∶150∶7，V／V／V)
流速 1．0mL／min
进样量 20μL
保留时间 6．7min
3．3．2 气相色谱法测定DME-OH
检测器 FPD-S
色谱柱 Φ4mm×0．4m玻璃柱，3%FFAP／GCS880 AW DMCS80～100目
检测温度 柱温230℃，进样口280℃，检测器255℃
载气 高纯氮，25mL／min
燃烧气 空气1．3kg／cm2，氢气1．2kg／cm2
保留时间 3．5min
4．结果计算
烯草酮 外标(峰面积)-标准曲线法定量。
DME-OH 外标(峰面积的平方根)-标准曲线法定量。
5．灵敏度、准确度和精确度
最小检出量 烯草酮1．5×10－9g；DME-OH5×10－10g。
最低检测浓度 0．01mg／kg。
回收率 油菜籽、植株和土壤中添加烯草酮0．2～5．0mg／kg时，平均回收率分别为85．6%～101．6%、85．1%～90．1%和82．3%～89．6%，见表3-11-1。添加DME-OH0．2～5．00mg／kg时，平均回收率分别为83．6%～98．8%、86．3%～96．5%和98．7%～102．0%。见表3-11-2。
相对标准偏差 3．1%～16．5%，见表3-11-1、3-11-2。
表3-11-1 油菜籽、植株和土壤中烯草酮添加回收率及相对标准偏差实验结果
表3-11-2 油菜籽、植株和土壤中DME-OH添加回收率及相对标准偏差实验结果
6．油菜籽、植株和土壤中烯草酮和DME-OH测定谱图
见图3-11-1。
图3-11-1 油菜籽、植株和土壤中烯草酮和DME-OH测定谱图