冷冻精液及其应用
出处：按学科分类—农业科学 中国农业出版社《肉羊饲养技术手册》第113页（2486字）
精液的冷冻保存解决了精液长期保存和运输困难的问题，可以极大地提高优良种公羊的利用率，加速良种推广步伐。
家畜精液冷冻保存的研究，始于20世纪40年代末。至50年代后期，牛精液冷冻保存效果已接近新鲜精液的水平，并广泛应用于生产。而绵羊精液具有特殊性，如具有较高的代谢水平，非常不耐冷冻，冷冻后的精液受胎率低。因此，羊的精液冷冻保存技术的进展比牛缓慢。在国外，50年代初绵羊精液冷冻获得成功，但情期受胎率为5%～30%；60年代也只有11．5%～44．3%；70年代为30%～63%。80年代初，据罗马尼亚35万只绵羊试验，冷冻精液的情期受胎率为60%～63%；前苏联1．5万只绵羊试验，情期受胎率为50%～60%。
我国1974年开始了绵羊精液冷冻保存的研究并获得成功，但情期受胎率较低，仅为17．5%。1976年由中国农科院畜牧所主持新疆、内蒙古、青海、山西、吉林、黑龙江、四川七省(自治区)的10个单位成立了全国绵羊精液冷冻技术研究协作组，1981年协作组统一组织下进行大规模的生产应用试验，输精10982只母羊，情期受胎率平均达53．9%。新疆800只母羊试验情期受胎率为50%～80%，平均达67．6%。
山羊精液的冷冻技术，国外从20世纪60年代开始试验，并获得成功，如德国山羊冷冻细管精液情期受胎率达68．9%～88．9%；法国山羊冷冻细管精液与新鲜精液的受胎率基本相同。我国70年代进行了山羊精液冷冻试验并获得成功，80年代中期在江苏、山东、安徽三省毗邻的9个县进行生产性应用试验，情期受胎率达71%。最近几年，陕西省畜牧所、江苏省徐州市家畜良种站生产的波尔山羊冷冻精液颗粒，情期受胎率达60%左右，高的达75%以上。
冷冻精液的操作技术：
①精液的采集 按常规方法用假阴道采集公羊的精液，并进行品质鉴定，检查射精量、原精活力、精子密度等项目。原精活力在0．7以上方可冻精。
②精液的稀释 配制羊的冷冻精液专用稀释液，以1∶2～5倍的比例稀释。
绵羊精液常用的稀释液，A方：乳－葡－柠稀释液。100毫升蒸馏水，加5．5克乳糖、3．0克葡萄糖、1．5克柠檬酸钠，取上液75毫升加新鲜卵黄20毫升、甘油5毫升加青霉素、链霉素各10万单位。B方：55毫升蒸馏水，加2．25克葡萄糖、1．13克柠檬酸钠、4．13克乳糖、0．003克VB1、0．11克磷酸氢二钠、0．021克磷酸二氢钾，加15毫升卵黄、10毫升脱脂乳、15毫升羊血清、5毫升甘油，再加青、链霉素各10万单位。C方：74毫升蒸馏水，加1．7克柠檬酸、1．25克果糖、3．028克三基，加卵黄20毫升、甘油6毫升，再加青霉素、链霉素各10万单位。D方：11%的乳糖溶液75毫升，加卵黄20毫升、甘油5毫升，青霉素、链霉素各10万单位。
山羊精液常用的稀释液。A方：乳糖6克、柠檬酸钠1．5克、蒸馏水100毫升，加青霉素、链霉素各10万单位。B方：乳糖3．8克、葡萄糖2．6克、柠檬酸钠1．3克、蒸馏水100毫升，加青霉素、链霉素各10万单位。C方：乳糖4．6克、葡萄糖3．1克、柠檬酸钠1．5克、蒸馏水100毫升，取A方、B方液各80毫升，C方105毫升，分别加入卵黄20毫升，甘油5毫升，青霉素、链霉素各20万单位。
③精液的平衡 精液稀释后，需在1～5℃条件下进行平衡，方法同低温保存，静置平衡2～4小时。
④颗粒或细管冻精的制作 颗粒冻精的制作最为简便，所需设备少。但缺点是不能单独做标记，容易混杂，且解冻时需一粒粒进行，速度很慢。细管冻精在冷冻和解冻过程中细管受温均匀，冷冻效果较好，并便于标记和保存。其操作方法：冷冻颗粒多采用铝板或氟板在离液氮面2～3厘米熏蒸，然后把稀释好的精液滴在板面上冷冻。颗粒的大小一般在0．1毫升左右，即每毫升约滴10粒。滴满后，停留2～3分钟，便可把颗粒精液全部浸入液氮中，停留片刻，便可制成颗粒冷冻精液。然后取出1～2粒，解冻后检查精子活力，活力在0．3以上者，注明品种、批号，收集于塑料瓶或装青霉素的空瓶内保存。
冷冻细管精液多采用液氮熏蒸法。把精液细管平放在特制的架子或纱网上，放在盛有液氮绝热容器内，在液氮面上离30厘米然后依次下降20、15、10、4厘米先熏蒸8～10分钟，再浸入液氮。
目前，我国大多数单位使用法国卡苏(IMV)公司生产的细管分装机进行分装冷冻，细管上还可以印上品种代号和生产批号。
⑤冷冻精液的保存和运输 冷冻精液必须放在液氮贮精罐内备用。在贮存期间，如不取用精液，不要随便打开罐盖。同时，还需定期检查罐内液氮消耗量，不足60%时，即应及时补充液氮。如用干冰保存，则可用五磅热水瓶，先装入约1／3的干冰，把盛有颗粒精液的小瓶置于干冰上，随即覆盖干冰，加盖瓶塞，然后放进干冰保存箱中保存。
⑥冷冻精液的解冻和输精 颗粒冻精的解冻，可将2．2%～2．9%的柠檬酸钠溶液0．1毫升注入消毒的小玻璃瓶或安瓶内，并放入70～75℃(绵羊冻精)或45～60℃(山羊冻精)的温水杯中，然后取出颗粒精液一枚，投入解冻液内，并轻轻摇动；细管冻精可直接解冻，10～15秒钟后立即取出，以防精子被烫死。解冻后的精液，应立即输入发情母羊。