胰蛋白酶和胰凝乳蛋白酶(从动物胰脏中提取)
出处：按学科分类—工业技术 企业管理出版社《精细化学品制备手册》第322页（2570字）
制法
提取胰蛋白酶及胰凝乳蛋白酶主要采用两种途径：一种是从动物胰脏中直接提取，另一种是从猪胰残渣中提取。
(1)直接从动物胰脏中提取胰蛋白酶和胰乳蛋白酶
①预处理 把新鲜动物的胰脏(或冷冻胰脏)放阴凉处，剪去脂肪和结缔组织，用清水洗净胰脏，切成小块，用绞肉机绞碎(可反复绞两次)。
②提取 将绞碎的胰糜移入搪瓷缸中，加入2倍体积的自来水，在搅拌下加入1mol／L硫酸溶液，调节pH值至3．0，间歇搅拌18～20h，然后用双层纱布压滤提取液，收集滤液备用。滤渣再加1～1．5倍体积的自来水，用1mol／L硫酸调节pH值至3．0，搅拌提取1～2h，然后过滤，收集滤液，对滤渣再重复提取一次。合并3次滤液，用试纸测试pH值，用5mol／L的硫酸或5mol／L氢氧化钠调节pH值至2．5，静置5～6h，在4℃条件下，用菊形滤纸自然过滤，除去杂质，收集滤液。
③盐析制取酶原 将收集的滤液移入另一搪瓷缸中，在搅拌下缓慢加入1kg硫酸铵，静置过夜，次日离心分出盐析物。盐析物用吊布吊干，也可用布氏漏斗抽滤至干，滤饼即为粗酶原混合物，不用时可置4℃保存。
④酶原的激活 把滤饼用10倍体积的4℃冷水溶解，不断搅拌使完全溶解，加入0．2kg氯化钙，用氢氧化钠溶液调节混合液pH值至8．0，然后加入2～3ml结晶胰蛋白酶，放置4℃处18～24h，使酶原激活。激活后，立即过滤除去不溶物，收集滤液。滤液中含有大量胰蛋白酶和胰凝蛋白酶。
⑤胰蛋白酶和胰凝乳蛋白酶原的分离 把滤液用5mol／L的硫酸调节pH值至2．5，搅拌下加入0．3kg硫酸铵，放置4℃处过夜，次日过滤收集盐析物和滤液。盐析物中含有胰凝乳蛋白酶，滤液则含有胰蛋白酶。
把含有胰蛋白酶的滤液在4℃条件下，搅拌加入1kg硫酸铵，在4℃条件下静置过夜，次日过滤，收集沉淀物，然后冷冻干燥即得胰蛋白酶粗品。
把含有胰凝乳蛋白酶的盐析物用0．2mol／L、pH值为5．0的硼酸缓冲液溶解，然后过滤收集滤液，加入0．3kg硫酸铵，于4℃放置过夜，次日抽滤，收集沉淀物，冻干即为胰凝乳蛋白酶粗品。
⑥制取胰凝乳蛋白酶 把胰凝乳蛋白酶粗品，用0．001mol／L盐酸溶解，放在透析袋中对水透析除盐，至无硫酸钡白色沉淀产生为止，然后冻干，即为胰乳蛋白酶干粉产品。
⑦制取胰蛋白酶 用预冷至4℃的0．4mol／L、pH值9．0的硼酸缓冲液把胰蛋白酶溶解，然后过滤除去杂物。滤液用1mol／L氢氧化钠调节pH值为8．0(调节应准确)，在4℃放置过夜，当有大量沉淀产生时，加入1／4倍体积经预冷至4℃的0．2mol／L、pH值为8．0的硼酸缓冲液，使沉淀分散。然后放置使其结晶。等大量沉淀出现后，用离心机分离出淀物，吊干，经冷冻干燥，即可得到胰蛋白酶产品。
(2)从猪胰残渣中提取胰蛋白酶和胰乳蛋白酶
①提取 将提取胰岛素后的猪胰残渣按配方量放入搪瓷缸中，加入10倍体积左右的清水，在搅拌下，用盐酸调节pH值至2．5～3．0，然后室温下间歇搅拌20h，用离心机分出提取液备用，弃去残渣。
②盐析 将提取液移入另一搪瓷缸中，在搅拌下，缓慢加入1kg硫酸铵，静置过夜，次日滤除上清液，沉淀物用滤布滤干，得盐析物(产率一般为8%)。
③激活 把盐析物放入搪瓷桶中，加入10倍体积冷水，缓慢搅拌使其全部溶解，再缓慢加入0．2kg氯化钙粉末，然后用氢氧化钠溶液调节pH值为8．0，加入2～3mg胰蛋白酶，放置在4℃条件下过夜。过滤除去硫酸钙沉淀，用硫酸调节滤液pH值至2．5，静置过夜，然后除去杂物，收集滤液。
④二次盐析 将滤液移入另一搪瓷桶中，搅拌下慢慢加入硫酸铵粉末1kg，静置过夜。次日过滤，除去上清液，收集盐析物(产率为4%)。
⑤透析 将盐析物加入2倍体积4℃的0．001mol／L盐酸中，调节pH值至3．0，在4℃条件下，用0．001mol／L盐酸透析除去盐，收集透析酶液。
⑥柱层析 先将透析的酶液用0．01mol／L、pH值5．0的柠檬酸钠缓冲液透析平衡，过滤除去杂物，将滤液上CMC柱(先用柠檬酸钠缓冲液平衡好)，用柠檬酸钠缓冲液洗涤，流速40ml／h(柱3cm×10cm)，洗至流出液无色为止。
⑦制备胰凝乳蛋白酶 用0．05mol／L、pH值5．0的柠檬酸钠缓冲液进行洗脱，洗脱液加0．3kg硫酸铵粉末，盐析过夜，收集盐析物，然后用稀盐酸透析除盐，冷冻干燥，即得胰凝乳蛋白酶。
⑧制备胰蛋白酶 将CMC从柱中倒入搪瓷桶中，加入1．5倍体积的0．1mol／L、pH值6．0的柠檬酸钠缓冲液，室温下搅拌洗脱1．5h，收集洗脱液(CMC可经处理后再用)，加入1kg硫酸铵粉末，盐析过夜，过滤收集盐析物，弃去上清液。然后冷冻结晶即得胰蛋白酶晶体，干燥即为干粉产品。
胰蛋白酶和胰凝乳蛋白酶在外科手术中用于消肿和消炎，消除坏死组织，促进创口愈合。在皮革工业、纺织工业、医药工业、日化工业都广泛应用这两种酶。