栀子黄
出处：按学科分类—工业技术 中国轻工业出版社《食品添加剂分析检验手册》第115页（4146字）
别名：藏花素
结构式：
分子式：C44H64O24
相对分子质量：976．966
一、栀子黄的鉴别
(1)本品水溶液最大吸收峰波长为440nm。
(2)取0．5g本品，加入2mL浓硫酸，着色剂溶液即由深青色慢慢变为紫色，然后变为褐色。
(3)微晶纤维素薄层层析，流动相为异丙醇∶丙酮∶水=5∶6∶5，有两个斑点：
藏花素：Rf=0．6
藏花酸：Rf=0．9
二、食品中栀子黄的测定
Determination of Crocin in Foods
(一)第一法 高效液相色谱法
1．原理
样品中栀子黄经提取净化后，用高效液相色谱法测定，以保留时间定性、峰高定量，栀子甙是栀子黄的主要成分，为对照品。
2．试剂和溶液
试剂均为分析纯，水为蒸馏水。
2．1 甲醇。
2．2 石油醚 60～90℃。
2．3 乙酸乙酯。
2．4 三氯甲烷。
2．5 姜黄着色剂。
2．6 栀子苷。
2．7 栀子苷标准溶液 称取2．75mg栀子苷标准品，用甲醇溶解，并用甲醇稀释至100mL混匀。即得27．5μg／mL栀子苷。
2．8 栀子苷标准使用液 分别吸取栀子苷标准溶液0，2．0mL，4．0mL，6．0mL，8．0mL于10mL容量瓶中，加甲醇定容至10mL，即得0，5．5μg／mL，11．0μg／mL，16．5μg／mL，22．0μg／mL的栀子苷标准系列溶液。
3．仪器
3．1 小型粉碎机。
3．2 恒温水浴。
3．3 高效液相色谱系统 Water’s M510泵，U6K进样器，岛津RF－535荧光检测器，Bluechip／PC计算机和Baseline 810色谱控制程序。
4．测定方法
4．1 样品处理。
4．1．1 饮料：将样品温热，搅拌除去二氧化碳或超声脱气，摇匀后，通过微孔滤膜0．45μm过滤，滤液备作HPLC分析用。
4．1．2 酒：样品通过微孔滤膜过滤，滤液备作HPLC分析用。
4．1．3 糕点：称取10g样品放入100mL的圆底烧瓶中，用50mL石油醚加热回流30min，置室温。用砂芯漏斗过滤，石油醚洗涤残渣5次，洗液并入滤液中，减压浓缩石油醚提取液，残渣放入通风橱至无石油醚味。用甲醇提取3～5次，每次30mL，直至提取液无栀子黄颜色，用砂芯漏斗过滤，滤液通过微孔滤膜过滤，滤液贮于冰箱备用。
4．2 测定。
4．2．1 HPLC参考条件如下：
色谱柱：粒度5μmODSC18150mm×4．6mm；
流动相：甲醇+水(35+65)；
流速：0．8mL／min；
波长：240nm。
4．2．2 标准曲线：在本实验条件下，分别注入栀子苷标准使用液0，2μL，4μL，6μL，8μL，进行HPLC分析，然后以峰高对栀子苷浓度作标准曲线。
4．2．3 样品测定：在实验条件下，注入5μL4．1项下的样品处理液，进行HPLC分析，取其峰与标准比较，测得样品中栀子苷含量。
5．分析结果的表述
计算 按式(5－12)计算：
式中 x——样品中栀子黄着色剂的含量，g／kg
m1——进样液中栀子苷的含量，μg
V——样品制备液体积，mL
m——样品质量，g
说明：本方法栀子苷的检测限为3．2μg／mL，栀子黄着色剂浓度在0．2～0．3g／kg范围内，饮料、酒、蛋糕回收率分别为94．1%，92%，91．3%。相对标准差(R．S．D)：2．69%，4．70%，3．20%。
(二)第二法 薄层色谱法
1．原理
样品中栀子黄着色剂用有机溶剂提取，并经过净化处理，去除干扰物质，浓缩点样展开后，在UV254nm灯下呈黑色斑点，与标准比较进行定性，及概略定量。
2．试剂和溶液
所用试剂均为分析纯，水为蒸馏水。
2．1 甲醇。
2．2 乙醇。
2．3 乙酸乙酯。
2．4 丙酮。
2．5 甲酸。
2．6 三氯甲烷。
2．7 硅胶GF254 薄层色谱用。
2．8 展开剂 乙酸乙酯+丙酮+甲醇+水(5+5+1+1)。
2．9 展开剂 三氯甲烷+甲醇(6+3)。
3．仪器
3．1 全玻璃浓缩器。
3．2 薄层板涂布器。
3．3 玻璃板 4cm×20cm；20cm×20cm。
3．4 层析缸。
3．5 UV254nm荧光灯。
3．6 微量注射器。
4．测定方法
4．1 样品处理 将酒、饮料、蛋糕样品处理后，进行TLC检识。见4．2．2展开结果。
4．1．1 酒：取样品100mL，减压浓缩至无酒味，然后用乙酸乙酯萃取，每次30mL，萃取3～5次，至无栀子黄颜色为止，合并萃取液，减压浓缩至无乙酸乙酯味。约剩20mL为止，此液留作薄层分析用。
4．1．2 饮料：取样品100mL，用乙酸乙酯萃取，每次50mL，萃取3～5次，至无栀子黄颜色为止。合并萃取液，减压浓缩至无乙酸乙酯味，约剩20mL，此液留作薄层分析用。
4．1．3 蛋糕：称取10．0g已粉碎均匀的样品，加海沙少许，混匀，用热风吹干样品(用手摸已干燥即可)，加入50mL石油醚搅拌，放置片刻，弃去石油醚，如此反复处理3次，以除去脂肪，吹干后研细，放入索式提取器，用甲醇提取着色剂，直到无栀子黄着色剂为止，直至着色剂全部提完，置水浴浓缩至约5mL，此液留作薄层层析用。
4．2 测定。
4．2．1 点样：取市售硅胶GF254荧光板，离板底边2cm处点样品提取液0．5μL，板的右边点2μL栀子黄色素标准溶液。
4．2．2 展开：将4．2．1项已点好样和标准的板，用2．8，2．9展开剂展开，待栀子黄着色剂明显分开后取出，晾干，与标准斑点比较，栀子黄Rf为0．64和0．50。而姜黄着色剂为0．11和0．15。样品与标品的斑点的Rf一致，则证明样品中的着色剂为栀子黄着色剂。