硒的测定(3，3－二氨基联苯胺比色法)

出处：按学科分类—医药、卫生 中国科学技术出版社《食物营养分析实用手册》第50页（1557字）

硒是动物和人生长必需的微量元素之一，起调节氧化还原反应速度，强化某些酶系的活性，调节维生素A、C、E、K在体内的吸收与消耗，硒是谷胱甘肽氧化酶的重要组成部分，牛、羊、马、鸡等缺硒时能引起“白肌病”，出现心肌坏死，微血管出血等症状。硒过量也可引起中毒(食物中不得超过5毫克／公斤)。

硒的测定常用比色法，在微酸性条件下，硒与3，3′－二氨基联苯胺形成黄色络合物。此络合物在中性溶液中能用甲苯或二甲苯等有机溶剂提取。从而使有机层显黄色。根据黄色的深浅可以比色测定。

试剂

(1)混合消化液：发烟硝酸：高氯酸∶硫酸为10∶4∶5；

(2)5%EDTA－2Na溶液；

(3)5%氢氧化钠溶液；

(4)1∶1盐酸溶液；

(5)0．5%3，3′－二氨基联苯胺溶液；

(6)硒标准溶液：准确称取100毫克硒，置50毫升小烧杯中，加入1∶1盐酸10毫升，加热溶解，冷却并移至100毫升容量瓶中，用10%硝酸溶液洗小烧杯并合并洗液于容量瓶中，并用10%硝酸稀释至刻度。此贮备液每毫升含硒1毫克。

(7)硒标准工作液(1微克／毫升)：吸取0．1毫升贮备液，用10%硝酸稀释至100毫升。

操作步骤

1．样品处理：称取细碎样品1～2克(果蔬类称取10克)，置150毫升圆底烧瓶中，接上冷凝装置，加入20毫升混合消化液，小心加热至样品溶液呈无色透明为止。冷却后加入2毫升5%EDTA－2Na溶液，此为样品测定溶液。同时作空白试验。

2．标准曲线的绘制：准确吸取硒标准工作液(1微克／毫升)0．0，2．0，4．0，6．0，8．0，10．0毫升。分别置分液漏斗中，加水至35毫升。分别加入5%EDTA－2Na溶液1毫升，混匀，并用1∶1盐酸调节溶液至pH2～3左右。各加0．5%3，3′－二氨基联苯胺溶液4毫升，摇匀，置暗处30分钟，再用5%氢氧化钠溶液调节至中性。加入10毫升甲苯振摇2分钟，静置分层，弃去水层，甲苯层通过棉花栓过滤于比色皿中，置721型分光光度计，在420nm波长处测定光密度。

以光密度为纵坐标，硒含量为横坐标绘制标准曲线。

3．样品分析：准确吸取适量的消化样品液(视样品中硒含量而定)，置于分液漏斗中，加水至总体积为35毫升。加入5%EDTA－2Na溶液1毫升，摇匀，以下操作同标准曲线的绘制。测定其光密度。

4．计算：

式中：A：标准曲线查得，并计算每毫升样品液含硒量(微克)；

C：样品液总体积(毫升)；

W：样品重(克)；

1000：换算微克为毫克；

100：换算为百分含量。