单宁的比色法测定

出处：按学科分类—医药、卫生 中国科学技术出版社《食物营养分析实用手册》第236页（1366字）

在高粱等饲料中存在的单宁，是一类高分子多元酚化合物，可溶于水或酒精，可与蛋白质结合成不溶性复合物。具涩味。用比色法测定单宁，准确、快速，是一种比较普遍的应用方法。

单宁类化合物在碱性溶液中将磷钨铝酸还原，产生深蓝色，可用比色法测定。

试剂

(1)F-D(Folir-Denis)试剂：称取Na₂WO₄·2H₂O100克，加入750毫升水，再加入磷钼酸20克，磷酸50毫升，回流2小时，冷却后，稀释至1000毫升。

(2)碳酸钠饱和溶液：称取无水Na₂CO₃70克，加入200毫升水，在70～80℃时溶解，并放置过夜。用Na₂CO₃·10H₂O结晶种入晶种于过饱和溶液中，待其结晶后过滤。

(3)单宁酸标准溶液：称取单宁酸50毫克，置50毫升容量瓶中，加蒸馏水溶解并稀释至刻度，混匀。然后再用蒸馏水稀释10倍，此溶液为每毫升含单宁酸0．1毫克(0．1毫克／毫升)。

操作步骤

1．样品的提取：称取粉碎高粱样品2～4克，置带塞三角瓶中，加蒸馏水50毫升，于60℃恒温箱中过夜，取出，振荡30分钟，干滤纸过滤，弃去前面少部分滤液，其余滤液备用。

2．标准曲线的制备：吸取单宁标准液(0．1毫克／毫升)，0．0，0．50，1．0，1．50，2．0，2．50，3．0，3．50毫升分别置于盛有30毫升蒸馏水的50毫升容量瓶中，加F-D试剂2．5毫升，饱和碳酸钠溶液5毫升，加水稀释至50毫升。充分混合，放置30分钟，在721型分光光度计于650nm波长处测定光密度值。以光密度为纵坐标，单宁毫克数为横坐标绘制标准曲线。

3．样品液的测定：吸取上述样品滤液1～2毫升，置于盛有30毫升水的50毫升容量瓶中，加入2．5毫升F-D试剂和5毫升饱和碳酸钠溶液，加水至50毫升，混匀，放置30分钟用，分光光度计测其光密度值。

4．计算

式中：50：提取液总体积(毫升)：

P：查标准曲线得样液含单宁毫克数；

W：样品重(毫克)；

V：测定时所取样液体积(毫升)；

100：换算为百分含量。

〔注〕①室温显色25分钟，颜色达最大深度，在3小时内稳定。

②单宁含量1毫克以下时，其光密度与单宁含量成线性关系。