人工授精
出处：按学科分类—农业科学 中国农业出版社《肉羊饲养技术手册》第96页（12630字）
在配种季节或常年将公母羊按1∶20～50的比例混群饲养，任其自由交配。这种方法虽然省事，受胎率也比较高，但公母羊混群饲养影响抓膘，浪费公羊精力，无法了解血缘而进行选种选配，易发生近交和早配，引起后代退化以及传染疾病等。为了克服以上缺点，可采取人工辅助交配的方法，将发情母羊挑出来和指定的公羊交配。
人工授精是一种科学的、先进的配种方法，是用人工方法将公羊精液采出，经稀释等处理后输入发情母羊使其受孕的方法。
1．人工授精的意义 人工授精与自然交配比较。主要优点是：
(1)可以提高优良种公羊的利用率。绵山羊如自然交配，每只公羊交配一次，只能使1只母羊受孕，一个配种季节，1只种公羊只能配50～80只母羊。如果采用人工授精的方法，可以把1只公羊一次射出的精液稀释后配几十只母羊。种公羊的利用率可提高20倍左右。在当前绵山羊改良过程中良种公羊不足的情况下，采用人工授精技术，就可以大大提高种公羊的利用率，用较少的良种公羊，繁殖大量优质或杂交羊，加快良种推广速度。
(2)可以少养种公羊，节省饲料、饲草和饲养管理费用，降低养羊成本；特别是在肉用种公羊主要靠国外引进的情况下可以减少种羊进口，节省大量外汇。
(3)可以提高母羊的受胎率。人工授精可以将种公羊的精液准确地输入到发情母羊的子宫或子宫颈内，增加了卵子受精的机会，克服了母羊因子宫颈位置不正或由于阴道疾病而不易受孕的缺点，提高受胎率。
(4)可以防止疾病传染。自然交配公母羊直接接触，容易传播某些传染病和生殖器官疾病，而采用人工授精，公母羊不直接接触，疫病不易传播。
(5)可以延长和扩大种公羊精液的利用年限和供种范围。精液通过稀释、保存，特别是冷冻精液不仅可以长期保存和远距离运输，不受时间和地域的限制，解决了种公羊不足的地区母羊的配种问题。
2．人工授精器械和常用药品
(1)器械 干燥箱、恒温箱、显微镜、盖玻片、载玻片、擦镜纸、血球计数器、pH试纸、长柄镊子、酒精灯、滤纸、假阴道外壳、假阴道内胎、气嘴、胶塞、集精瓶、白凡士林、量筒、玻璃棒、温度计、采精架、开膣器、注射器或输精器、输精调节器、电筒、磁盘、脸盆、毛巾、肥皂等。
(2)药品 0．9%氯化钠溶液、柠檬酸三钠、葡萄糖、EDTA(乙二胺四乙酸二钠)、氢氧化钠、乳糖、果糖、新鲜鸡蛋、青霉素、链霉素、双蒸馏水。
3．采精场所的准备 采精一般要在固定的采精场或采精室进行。采精场所应该宽敞、平坦、安静、清洁、挡风避雨，并注意地面防滑，并设有采精架保定台羊，供公羊爬跨，便于采精。台羊可以用同品种活母羊或公羊，也可以用假台羊。应用假台羊采精是一种方便、清洁、安全的极为有效的方法。采精架可以用木材做成呈塔井形，上有活闩。采精架必须安装牢固。架高50～60厘米，上闩宽20厘米左右，下闩宽25厘米左右，也可根据不同品种的体型而定。
4．采精前的准备
(1)器材的清洗与消毒 凡是采精、输精及与精液接触的一切器械、用具，都必须做到清洁无菌、干燥。不管是新购进的器具，还是已使用过的器具，都要仔细洗刷干净，然后消毒，存放在清洁的厨柜或搪瓷盘内，用消毒过的纱布盖好备用。
一般传统的洗涤剂是2%～3%的碳酸氢钠或1%～1．5%的碳酸氢钠溶液，并可采用洗洁精。器材用洗涤剂洗刷后，必须立即用清水多次冲洗干净而不留残迹，然后严格消毒备用。消毒方法，因各种器材的质地不同而不同。
玻璃器材：最好采用电热鼓风干燥箱进行高温干燥消毒，要求温度控制在130～150℃，并保持20～30分钟，待温度降至60℃以下时，方可开箱取出使用。也可采用高压蒸气消毒维持20分钟。
橡胶制品：一般采用75%的酒精棉球擦拭消毒，最好再用95%的酒精棉球擦拭一次，以加速挥发残留在橡胶上面的水分和酒精气味，然后用生理盐水冲洗。
金属器械：可用新洁尔灭等消毒溶液浸泡，然后用生理盐水等冲洗干净，也可以用75%的酒精棉球擦拭或用酒精灯火焰消毒。
溶液：如润滑剂、生理盐水等，可隔水煮沸20～30分钟或用高压蒸气消毒，消毒时为了避免玻璃瓶爆裂，瓶盖要取下或橡胶皮塞上插上大号注射针头，瓶口用纱布包扎。
(2)假阴道的准备 假阴道是采精的主要工具。采精成功与否取决于假阴道的温度、压力和润滑度。临采精之前，要把安装的假阴道灌入50℃左右的温水150～180毫升，然后用消毒过的玻璃棒沾上凡士林等润滑剂，均匀的涂在内胎的前1／2～2／3的地方，增加润滑度。再从活塞孔吹入适量空气，以保持假阴道内一定的压力，假阴道内胎口成一三角形时，即表示压力合适。假阴道内胎的温度，以保持到39～41℃为宜。羊对假阴道内的温度比压力更敏感。因此，要特别注意温度的调节。
5．采精 采精是人工授精的第一步，包括采精技术操作和采精频率等。
(1)采精操作 将公羊引到台羊前，采精员半蹲在台羊后部右侧，右手持已准备好的假阴道。当公羊爬跨台羊时，迅速将阴茎导入假阴道内。采精员在采精时要注意假阴道倾斜的角度与公羊阴茎伸出方向成一直线。由于公羊射精时间非常短促，用力向前一冲时即行射精，因此要求采精员动作敏捷准确，注意防止阴茎导入时突然弯折而损伤，要紧紧握住假阴道，防止掉落。射精后，采精员即将假阴道的集精杯一端朝下，以便精液流入集精杯中。当公羊跳下时，假阴道随着阴茎后移，不要抽出。阴茎由假阴道自行脱出后，即将假阴道直立，筒口向上，并立即送至化验室，取下集精杯，以备检查。
(2)采精频率 合理安排公羊的采精频率，对维持公羊正常的性机能、保持健康的体质和最大限度地提高采精数量和质量都是十分重要的。绵山羊配种季节短，射精量少而附睾内的贮精量大，因此在配种季节内每天多次采精并连续数周也无问题。1．5岁左右的公羊，如初次参加配种，每天1～2次；2岁半以上公羊，每天则可采3～4次，分上下午进行。也可以第一次采精后隔5～10分钟再采第二次。因第一次采精时，性兴奋未消除，第二次射精量较大，且活力更强。
在正常的情况下，种公羊隔天采精一次的方式，利用率明显不足。据有关试验结果看，采精频率1天1次时，持续采精5天休息1天，经两个反复，与隔天采精1次比较，公羊性欲、精液品质均无大变化。而个体采精量则显着提高。在持续3天的不同采精频率中，1天2次采精的采精量高于1天1次采精量，1天3次采精量又高于前两者。由此可以认为，提高绵、山羊的采精频率和延长采精的持续时间，是提高种公羊利用率的有效措施之一。在母羊发情配种季节里，初步认为采精方式以1天采精1次，持续5天，或1天采精两次，持续3天的方式较为适宜。这两种方式在试验期内没有发现精液质量问题，而且有较高的采精量。
1天采精3次，虽然采精量最高，但持久性差。据有关试验的第二轮采精周期中，精液质量有下降趋势，不宜采用。如果提高种公羊的饲养水平，也将是提高公羊采精能力的一个有效措施。从年龄上考虑，3～5岁公羊可每日采精2次；1．5岁公羊，每日采精一次为宜。
6．精液品质检查 精液品质检查的目的是为了鉴定精液品质的优劣。评定的各项指标即是确定新鲜精液进行稀释、保存的依据；又可以反映公羊饲养管理水平和生殖器官的机能是否正常。因此，精液品质鉴定是诊断公羊不育或确定种用价值的重要手段。同时也是辨别精液在稀释、保存、冷冻和运输过程中的品质变化及处理效果的重要依据。
(1)影响精子存活的各种因素
温度：温度影响精子的运动和生存。一般在37～38℃，精子能正常活动。随着温度的升高，精子活力加强，在45～50℃时，精子活动异常激烈，表现狂动。54～56℃时，精子迅速死亡。相反，温度下降使精子活动缓慢，10℃以下，精子呈摆动状态。5℃左右即停止活动。
渗透压：精子只能在等渗溶液中才能保持正常的形态和活力。渗透压是以冰点下降度表示，羊的冰点下降度为0．64度(0．55～0．70)。溶液的渗透压高，精子内部水分被吸出而发生皱褶，迅速死亡；溶液渗透压低，则溶液内的水分进入精子体内，而发生膨胀，甚至破体。因而在操作过程中，应尽量避免将水混入精液中，应用的稀释液也要与精液等渗。
酸碱度(pH)：酸性溶液能抑制精子活动，弱碱性溶液则可增强活动。适于精子存活的pH为7．0左右。pH对精子运动的最低限度为4～4．5，最高为10。
光照：阳光中的紫外线可引起精子受精能力下降，为了减少紫外线对精子的伤害，精液应贮藏在有色瓶内，处理时也应在室内进行。
化学药品及气味：药品、纸烟、酒精等对精子均有危害。因此，在操作过程中要避免有挥发性和特殊气味的药物混入精液中。
(2)精液检查操作的基本原则 采得的精液要迅速置于30℃左右的恒温水浴中或保温瓶中，以防温度下降，对精子造成低温打击。精液的化验室检查要保持室温在18～30℃和显微镜周围37～38℃下进行；检查精液时要求动作迅速；取样要有代表性，要求从全部并轻轻摇动的精液中取样；操作过程中不应使精液品质受到损害和其他异物的影响，如蘸取精液的玻璃棒等用具，既要消毒灭菌，又不能残留消毒药品及气味；对精液品质检查项目很多，主要项目要重点检查与定期全面检查，有些重要项目必要时应重复2～3次，取其平均值作为结果。对1只公羊精液品质和种用价值的评价，不能以少数几次检查的结果，而应以多次评定记录作为全面的综合分析的依据。
(3)精液品质鉴定的项目及其方法 在一般人工授精站羊的精液品质鉴定的常规项目包括：射精量、色泽、气味、云雾状、活力和密度等；定期检查项目包括：精子形态、抵抗力测定、存活时间等。
精液的外观检查：精液量、色泽、气味、云雾状等可以用肉眼检查。羊的精液呈乳白色，浓厚而不透明，肉眼观察时，可见精子翻动呈云雾状，每次射精量0．5～2．5毫升，一般1毫升左右。凡带有腐败臭味、红色、褐色、绿色的精液，不能用于输精，射精量突然过多或过少都应停止采精并及时查明原因。
精子的活力检查：精子活力是指精液中呈前进运动精子所占的百分率，称为活力。由于只有具有前进运动的精子才可能具有正常的生存能力和受精能力，所以活力与母羊的受胎率有密切关系，它是目前评定精液品质优劣的重要指标之一。一般鲜精子活力在0．6以下不可用于配种。常用的检查方法有：
目测评定法——活力检查通常采用光学显微镜放大200～400倍，对精液样品检查标本进行目测评定。精液样品检查标本的制作有三种方法：①平板压片法——用普通的玻璃片上滴一滴精液，然后用盖玻璃片均匀盖着整个液面，做成压片检查标本；②悬滴法——在盖玻璃片中央滴一滴精液，然后翻转覆盖在凹玻片的凹窝处。即制成悬滴法检查标本；③精液检查板法——精液检查板是由日本西川义正等人设计，可使被检查的精液样品厚度均匀地保持在50微米，因此观察时不易产生误差。使用时将精液滴在检查板中央，过量的精液将会自动流向四周，再盖上盖玻片，即制成检查标本。羊的原精液密度大，可用生理盐水、5%的葡萄糖溶液或其他等渗稀释液稀释后再进行制片。
精子的活动受室内温度影响极大。温度高了，活动加快；温度低了，则活动减弱。因此，检查时室温应保持在18～30℃之间，显微镜周围温度37～38℃的保温箱内进行。
精子运动方式可分为直线前进运动、旋转运动、摆动运动3种，精子的直线前进运动最有利于受精。评定精子活力时就是以精液中精子直线前进运动的百分比来决定的，其方法多采用五分制或十分制，具体见表6－1。
表6－1 精子活率评分
精子密度检查：精子密度通常是指每毫升精液中所含精子数。根据精子密度可以计算出每次射精量中的总精子数，再结合精子活率和每个输精量中应含有效精子数，即可确定精液合理的倍数和可配母羊的只数。因此，精子的密度与活力等同，也是评定精液品质优劣的常规检查中的主要项目。但一般只需在采精后对新鲜的原精液作一次性密度检查。
目前测定精子密度的主要方法是目测法、血细胞计数法和光电比色测定法。
目测法(又称估测法)——在检查精子活力时同时进行，在显微镜下可根据精子稠密程度，粗略地分为“稠密”、“中等”、“稀薄”、“无”四个等级。这种精子密度估测法和精子活力的测定一样，虽然方法简便但主要凭经验。主观性较大，因此误差也较大。
正常情况下，羊的精子密度最大，每毫升20亿～30亿，划分等级的标准大致如下：25亿以上为“密”，20亿～25亿为“中”，20亿以下为“稀”。
血细胞计计数法——采用该法计算精子与计算血液中红细胞、白细胞的操作方法相类似。这是一种比较准确地测定精子密度的方法，且设备比较简单，但操作步骤较多，故一般也只对公羊精液品质作定期检查时采用。其操作方法如下：
用红血细胞吸管吸至“0．5”，然后再吸入3%氯化钠溶液至“101”刻度，稀释200倍。以拇指及食指分别按住吸管的两端，充分摇动使精液和3%氯化钠溶液混合均匀，然后弃去吸管前端数滴，将吸管尖端放在计算板与盖玻板之间的空隙边缘，使吸管中的精液流入计算室，充满其中。在400～600倍显微镜下观察，以计数器数出5个大方格内精子数。计算时以精子头部为准，在方格四边线条上的精子，只计算上边和左边的，避免重复。选择的5个大方格，应位于一条直角线上或四角各取一个，再加上中央一个。求得五个大方格的精子总数后，乘上1000万或加七个零，即可得每毫升精液所含精子数。(图6－4)。
图6－4 采用血细胞计计数板计算精子方法示意图
左：将稀释后的精液从吸管滴入计算室
中：血细胞计算板的计算方格(粗线格为应计数的方格)
右：计算精子的顺序和方法(只计算头部为黑色的精子)
光电比色计精子密度测定法——美国Sa Iisbury等1943年以后研究应用此法，其原理是精子密度越高，其精液越浓，以至透光性越低，从而使用光电比色计通过反射光或透射光能准确地测定精液样品中的精子密度。目前世界各国已较普遍应用于牛、羊精子密度的测定。其优点是准确、快速、使用精液量少，仪器价格一般，且经久耐用，操作简便，一般技术人员均可掌握。其方法是事先将原精液稀释成不同倍数，并用血细胞计计算其精子密度，从而制成已知系列各级精子密度的标准管，然后使用光电比色计测定其透光度，根据透光度求出每相差1%透光度的级差精子数，编制成精子密度查数表备用。一般检测精液样品时，只需将原精液按1∶80～100的比例稀释后，先用光电比色计测定其透光值，然后根据透光法查对精子密度查数表，即可从中找出其相对立的精子密度值。
精子形态的检查：精子的形态正常与否与受胎率有着密切的关系。如果精液中形态异常的精子所占的比例过大，不仅影响受胎率，甚至可能造成遗传障碍，所以有必要进行精子形态的检查。特别是冷冻精液，对精子的形态检查更有必要。
一般绵山羊品质优良的精液，其精子畸形率不超过14%，普通的也不能超过20%，超过20%以上者，则会影响受精率，表示精液品质不良，不宜用作输精。
畸形精子一般分四类：①头部畸形，如头部巨大、瘦小、细长、圆形、轮廓不明显、皱褶、缺损、双头等；②颈部畸形，如颈部膨大、纤细、屈折、不全，带有原生质滴、不鲜明、双颈等；③体部畸形，如体部膨大、纤细、不全，带有原生质滴、弯曲、屈折、双体等；④尾部畸形，如尾部弯曲、屈折、回旋、短小、长大、缺损、带有原生质滴、双尾等。一般头、颈部畸形较少，体、尾部畸形较多。
精液中有大量畸形精子出现时，证明：①精子的生成过程中受到破坏；②副性腺及尿道分泌物有病理变化；③由精液射出起至检查时，或保存过程中，因没有遵守技术操作规程，精子受到外界不良影响。
畸形精子检查方法：先将精液用生理盐水或稀释液作适当稀释后，作涂片。干燥后，浸入96%酒精或5%福尔马林中固定2～5分钟，用蒸馏水冲洗。阴干后可用伊红(美兰、龙胆紫、红墨水也可以)染色2～5分钟用蒸馏水冲洗即可放在600～1500倍显微镜下检查，总数不少于300个。畸形精子率的计算：
在日常精液检查中，不需要每天检查，只有在必要时才进行。
精子顶体异常检查方法：绵山羊冷冻精液的品质是影响受胎率的重要因素之一。近年来，有些研究者认为，用精子顶体完整率来评定精液品质及受精力比用活力评定较理想。先用畸形率检查一下制成抹片，待自然干燥后再用福尔马林磷酸固定液中固定15分钟，水冲洗后用姬姆萨缓冲液染色1．5～2．0小时，再用水冲洗干燥后，用树脂封装，置于1000倍以上普通显微镜下随机观察500个精子(最少不得少于200个)，即可计算出顶体异常率。顶体异常的形态有膨胀、缺损、部分脱落和全部脱落等。
福尔马林磷酸盐固定液的配制：先配制0．89%氯化钠(NaCl)溶液。取2．25克Na2HPO4·12H2O和0．55克NaH2PO4·2H2O放入容量瓶中加入0．89氯化钠(NaCl)溶液约30毫升。在30℃左右待磷酸盐全部溶解，加入经碳酸镁(MgCO3)饱和的甲醛8毫升。再用0．89氯化钠(NaCl)溶液配制到100毫升，静止24小时后即可使用。
姬姆萨原液的配制：取姬姆萨染料1克，甘油66毫升，甲醛66毫升。先将姬姆萨粉剂溶于少量甘油中，在研钵内研磨，直至无颗粒为止，再将全部甘油倒入。置于56℃恒温箱中2小时，然后加入甲醛，密封保存于棕色瓶中。
精液存活时间和存活指数的测定：精子存活时间是指精子在一定外界环境下的总生存时间，而存活指数是指精液内的精子平均存活时间，亦即表示精液内精子活率下降的速度。精子存活时间越长，活率下降速度越慢，说明精子生活力越强，其精液品质越高，与受胎率呈正相关。其检查方法是：将稀释并经活率检查后的精液分装成若干等份置于一定温度等条件下保存，然后每隔一定时间随机抽取同类的一份样品经过升温等适当处理后，在37℃显微镜保温箱中进行活率检查，直至保存的精液中精子全部死亡为止。然后根据记录计算存活时间和存活指数。存活时间计算是由开始稀释检查时间至倒数第二次检查之间的间隔时间，加上最后一次与倒数第二次检查间隔时间的一半，其总和即精子总存活时间。存活指数计算是：每相邻前后两次检查的精子平均活率与其间隔时间的乘积相加的总和即为生存指数。
7．精液的稀释 绵山羊的精液密度大，一般一毫升原精液中约有25亿左右个精子，但每次配种，只要输入5000万～8000万个精子，就可使母羊受胎，精液稀释以后不仅可以扩大精液量，增加可配母羊只数，更重要的是稀释液可以中和副性腺和分泌物，缓解对精子的损害作用，同时供给精子所需要的营养，为精子生存创造一个良好的环境，从而达到延长精子存活时间，便于精液的保存和运输。
稀释液，应能供给精子所需的养分，以延长精子生存时间；渗透压与精子相同，不致破坏精子的细胞膜；酸碱度要成中性，能缓和精子的酸化和碱化，并能减少与消除副性腺和分泌物对精子的损害。
稀释液的主要成分和作用：
常用的主要成分：供给能量的有糖类，如葡萄糖、乳糖、果糖、蔗糖、蜂蜜等；缓冲剂类，如柠檬酸钠、磷酸二氢钾、磷酸氢二钠、明胶等；防冷抗冻物质，如卵黄、牛奶、羊奶、甘油、乙二胺四乙酸(EDTA)；抗菌类，如青霉素、链霉素、胺苯磺胺等；改善精子生存环境和母羊生殖道生理机能的添加剂：如过氧化氢酶、催产素、PGE、ATP、VB1、VB2、VB12、VC、VE等。
稀释倍数：精液进行适当倍数的稀释可以提高精子的存活力。绵山羊的精液一般稀释比例为1∶2～4；精子密度在25亿以上的精液可以1∶40～50稀释。根据试验，山羊精液以1∶10稀释的常温精液受胎率达95．16%，甚至以1∶20、1∶30、1∶40、1∶50、1∶80、1∶100等6种稀释比例，输精后的情期受胎率均在80%以上。其中1∶20～40的情期受胎率达91．74%～97．23%，1∶50～100的情期受胎率达81．82%～89．38%。
精液稀释的方法：精液在稀释前必须进行活力和密度检查，然后确定稀释倍数。为了防止精液温度突然变化，稀释液应现配现用，并将精液和稀释液同时置于30℃左右的水浴锅或恒温箱中，作片刻同温处理。稀释时，将稀释液沿杯(瓶)壁缓缓加入精液中，然后轻轻摇动或用灭菌玻棒搅拌，使之混合均匀。如作20倍以上高倍稀释时，应分两步进行，先加入稀释液总量的1／3～1／2作低倍稀释，稍等片刻后再将剩余的稀释液全部加入。稀释完毕后，必须作活力检查，如稀释前后活力一样，即可进行分装与保存。
8．精液的保存 精液保存时暂时抑制或停止精子的运动，降低其代谢速度，减缓其能量消耗，以达到延长精子存活时间而又不至于丧失受精能力。精液的保存方法，一般可按保存温度分为常温(15～25℃)保存、低温(0～5℃)保存、冷冻(－79℃或－196℃)保存等。
常温保存：常温保存的温度一般在15～25℃之间，春秋季放置室内，夏季可置于地窖或旱井中保存。由于保存温度不十分恒定，故又称变温保存或室温保存。常温保存无需特殊的温控和制冷设备，比较简便。特别是绵羊精液采用常温保存，比低温或冷冻保存的效果相对较好。一般绵山羊精液常温保存48小时以上，活力仍可达原精液活力的70%。常温保存的稀释液介绍如下：①新鲜牛奶或羊奶用数层纱布过滤，然后在水浴锅中加热至92%～95%，维持10～15分钟，冷却至室温，除去上层奶皮，每毫升加青霉素1000单位、链霉素1000微克，用于山、绵羊精液的稀释。②100毫升蒸馏水加10克明胶、0．1克后莫氨磺酰、0．15克磺胺甲基嘧啶钠、3克二水柠檬酸钠，每毫升再加青霉素1000单位、链霉素1000微克，适用于绵羊精液稀释。③100毫升蒸馏水加3克无水葡萄糖、1．4克柠檬酸钠溶解过滤后煮沸消毒15～20分钟，降至室温加入20毫升新鲜卵黄，每毫升加入青霉素1000单位、链霉素1000微克，适用于山羊精液稀释。④100毫升蒸馏水加5克乳糖、3克无水葡萄糖、1．5克柠檬酸钠、或加入5．5克葡萄糖、0．9克果糖、0．6克柠檬酸钠、0．17克乙二胺四乙酸二钠，溶解过滤消毒冷却后每毫升加青霉素1000单位、链霉素1000微克，适用于山羊精液稀释。⑤0．85%或0．89%氯化钠溶液高压灭菌后使用。
低温保存：是将按低温保存的稀释后的精液置于0～5℃的低温条件下保存。一般是放在冰箱内或装有冰块的广口保温瓶中冷藏。在这种低温条件下，精子处于一种休眠状态，运动完全消失，代谢降低到极低的水平。因此，精子的保存时间可以相对延长。由于绵羊精液的特异性，采用低温保存效果尚不理想，还有待于进一步研究。
采用低温保存精液时，首先要严格遵守逐步降温的操作规程，防止冷休克。其方法是待精液稀释分装后，先用数层纱布或药棉包裹容器，并以塑料袋包装防水，然后置于0～5℃的低温环境中。在整个保存期间应尽量保持温度恒定，防止升温或忽高忽低。常用的稀释液有：①100毫升的蒸馏水加2．8克二水柠檬酸钠、0．8克葡萄糖溶解过滤后消毒，冷却后加入25毫升新鲜卵黄，每毫升再加入青霉素1000单位、链霉素1000微克，适用于绵羊精液稀释。②100毫升蒸馏水加2．7克二水柠檬酸钠、0．35克氨基乙酸溶解过滤、消毒，降至室温后每毫升加入青霉素1000单位、链霉素1000微克，适用于绵羊精液稀释。③100毫升蒸馏水加10克奶粉，溶解后用多层纱布过滤，然后在水浴锅中加热至92～95℃，维持15分钟，冷却至室温，每毫升加入青霉素1000单位、链霉素1000微克，适用于山、绵羊精液稀释。
9．输精 输精是利用输精器械将精液输入母羊生殖道内。输精的方法，一般常用：
(1)开膣器法 此法适用于体格比较大的山羊。将待配母羊固定在配种架上，洗净并擦干母羊的外阴部，把已消毒过的开膣器插入阴道并轻轻摇动找到母羊的子宫颈，然后将输精器通过开膣器插入子宫颈内0．5～1厘米，用拇指压输精器的管塞，将0．05～0．1毫升精液注入子宫颈内即可。开膣器和输精器在使用前后，都应清洗干净并消毒。
(2)输精管阴道插入法 鉴于本地山羊由于阴道狭小，使用开膣器插入阴道内困难，可模拟自然交配的方法，把精液用输精管输到阴道的底部。具体方法是把山羊两后腿提起倒立，用两腿夹住羊的前驱进行保定。输精员用手拨开母羊阴户，输精管沿母羊背部插入到阴道底部输精，这种方法克服了用开膣器输精困难的障碍，并有良好的输精效果，在农村应用可以做到上门服务，方便群众。
常温或低温保存的精液，江苏已普遍采用羊一次性输精管输精。输精管的选材可以选择无毒、无色、透明直径为4毫米的半软质塑料管，硬度、弹性要符合输精要求。一次性输精管管长180毫米、容积0．5毫升，头盖和尾盖可以塞住也可以用烙铁封口(图6－5)。
图6－5 一次性山羊输精管
1．包装袋 2．头盖 3．精液管 4．尾盖 5．包装袋封口
分装稀释后的精液需在无菌环境下操作，用0．25厘米滴管吸取稀释好的精液，插入已剪去尾盖部的包装袋(需留一定距离，以便再封口)，并取下尾盖的一次性输精器，用手将塑料管弯成U形的一端开口处，沿管壁徐徐灌入稀释好的精液，输入量0．5毫升。拔出滴管，平衡U形管，即两端开口处离精液面各2厘米(呈空管)。然后再盖上尾盖，贴上标签，套进包装袋，将袋口重新封好即可发送或保存。
输精的方法：先拔掉一端头盖或剪去封口，由一人将待输精母羊保定，并对母羊阴户周围清洗、消毒处理。再掰开阴户，然后把输精管缓缓旋转插入母羊阴户一定深度时，取掉另一头的尾盖，精液即可自行流入子宫颈口内。如精液流入缓慢时，可轻轻改变输精管的角度或略作伸缩，以便精液流入。极个别的母羊精液流入困难时，也可借助洗耳球将精液压入子宫颈口内。输精完毕，轻轻抽出输精管，并在母羊背部拍打一下，放开母羊后腿，输精完毕。输精管用后即弃去(图6－6)。
图6－6 输精管插入的适当位置
输精应注意的事项：①输精适期：母羊排卵时间，通常在发情末期24～36小时卵子排出后，受精能力大约能保持12～24小时。从子宫颈口输入精子，大约30分钟到2小时，即可进入输卵管。精子在子宫颈内存活的时间为24～48小时(平均36小时)，进入输精管的精子，一般可存活5～8小时。由于活的精子连续不断地进入输卵管内，所以输卵管内保存的活精子时间会更长一些。因此，输精最迟应在排卵前8～12小时进行。一般适宜配种的时间是母羊发情后的第二天，大约是发情后的20～30小时内输精。②输精次数：一般采取一次试情，两次输精，即当天上午试情后下午进行第一次输精，第二天早上重复输精一次；下午试情，第二天上午、下午各输精一次。也可以采取在发情后的第二天一个情期输精一次。一次输精的有效精子数：绵羊一般要求7500万个以上；山羊5000万个以上。