出口饮料中维生素C的测定方法(摘自ZBX51001)

出处：按学科分类—工业技术 中国轻工业出版社《软饮料工业手册》第1000页（1992字）

本标准适用于各类出口饮料中维生素C(抗坏血酸)的测定。

(一)原理

样品先用草酸提取，然后用2，6－二氯靛酚将抗坏血酸氧化为顺式抗坏血酸，再与邻苯二胺结合生成一种荧光化合物。用荧光分光光度计测定荧光强度，与标准比较定量。

(二)试剂

要求使用去离子水及无荧光试剂。

(1)草酸溶液 1%水溶液。

(2)乙酸钠水溶液 50%水溶液。

(3)硼酸－乙酸钠溶液 3%硼酸水溶液加50%乙酸钠水溶液。

(4)邻苯二胺溶液 称取20mg邻苯二胺溶于100mL水中。

(5)2，6－二氯靛酚溶液 称取50mg2，6－二氯靛酚及50mg碳酸氢钠溶于50mL水中。

(6)硫脲溶液 2%水溶液。

(7)抗坏血酸标准溶液 精确称取20mg抗坏血酸溶于1%草酸液，移入100mL容量瓶内，并用1%草酸溶液稀释至刻度。混匀，置于冰箱中保存，此溶液每毫升相当于0．2mg抗坏血酸。

(8)抗坏血酸标准使用液：吸取25mL抗坏血酸标准溶液于50mL容量瓶中。以1%草酸稀释至刻度，此溶液每毫升相当于100μg的抗坏血酸。

(9)硫酸奎宁标准溶液，精确称取10．0mg奎宁，用0．05mol／L硫酸溶解后移入1000mL容量瓶中，并用0．05mol／L硫酸稀释至刻度，此溶液每毫升相当于10μg奎宁。使用时用0．05mol／L硫酸配制成每毫升相当于0．1μg奎宁。此溶液用来校正荧光计的灵敏度。

(三)仪器

荧光分光光度计。

(四)操作方法

1．样品处理

精确吸取VmL样品，用1%草酸溶液稀释到50mL，使其抗坏血酸的浓度在每毫升为10～100μg的范围内，摇匀。

2．测定

吸取1份抗坏血酸标准使用液5．0mL，置于50mL容量瓶中。另吸取样品溶液5．0mL，移入50mL容量瓶中。向各容量瓶中逐滴加入二氯靛酚溶液至标准液及样品溶液恰好显微红色。再加入2～3滴2%硫脲溶液使红色退去。用水稀释至刻度，摇匀。

取两支20mL试管，各加入样品溶液2．0mL，于甲管中加入硼酸－乙酸钠溶液1．0mL，摇匀，放置15min(此管为样品空白溶液)。于乙管中加入乙酸钠溶液1．0mL，摇匀(此管为样品溶液)。另取两支20mL试管，各加入抗坏血酸标准溶液2．0mL，然后与样品溶液相同，以甲管为标准空白溶液，乙管为标准溶液。

于四个试管中各加入邻苯二胺溶液6．0mL，摇匀后于暗处放置30min，然后置荧光分光光度计中。以365nm光源为激发光，选择灵敏度(每次用每毫升相当于0．1μg硫酸奎宁溶液校正仪器的灵敏度)。在429nm处测定标准和样品溶液的荧光强度。

3．计算

式中 X——样品中抗坏血酸含量，mg／100mL

F₁——样品溶液荧光强度

F₂——样品空白液荧光强度

F₃——标准溶液荧光强度

F₄——标准空白液荧光强度

c——抗坏血酸标准溶液浓度，mg／mL

V₁——吸取样液的体积，mL

V——样品混合液的总体积，mL