间接计数法

出处：按学科分类—农业科学 中国农业出版社《兽医微生物实验诊断手册》第120页（732字）

一、细菌总数测定

(一)麦氏管比浊法(McFarland’s nephelometer standards)取清洁试管10支，分别加入1%氯化钡溶液0．1、0．2、0．3、0．4、0．5、0．6、0．7、0．8、0．9、1ml，再加入1%纯硫酸液使每管总量均为10ml，然后用喷灯将管口熔化封固或用橡皮塞塞紧，贴上标签，分别作1、2、3……9、10的记号。各管浑浊度所表示的菌数见表7-4。

表7-4 浑浊度与菌数对照表

计数时取同一规格牌号的试管，盛被检菌液，与麦氏比浊管比，看它与哪一管的浑浊度相同，而间接推出被检菌液中的菌数。如被检液太浓，可用蒸馏水稀释后再计，后乘以稀释度。

(二)显微镜间接计数法 在喷灯上拉一玻璃毛细管，在离尖端约2cm处用蜡笔或毛笔作一记号，分别吸入等量人血(其他动物血液亦可，只要知道其红细胞数／每mm³)、菌液及2%柠檬酸钠溶液，吸各成分后可吸点空气，然后吹出(用橡皮乳头操作)于一清洁凹玻片上混合。由于有记号，各成分量相等，即血液与菌液量相等。取混合液一滴，按照推血片的方法推成一抹片，自然干燥后用瑞特氏液染色。做一剪有一孔的纸片放于目镜中，以缩小显微镜的视野，在油镜下计算50个视野中的血细胞数及细菌数。假定每mm³人血中有红细胞500万，而计得的血细胞数与细菌数之比为2∶1，则每mm³菌液含菌250万，每ml菌液中含菌量应是250万×1000=250亿。

二、活菌数测定

活体染色法或其他提出的方法，由于误差大，现很少采用。