疏螺旋体
出处：按学科分类—农业科学 中国农业出版社《兽医微生物实验诊断手册》第378页（3094字）
疏螺旋体是引起畜禽疏螺旋体病的病原。主要有鹅疏螺旋体和色勒氏疏螺旋体两种。
一、鹅疏螺旋体(Borrelia anserina)
鹅疏螺旋体又名鸡疏螺旋体(Borrelia gallinarum)引致鹅、鸭、鸡、火鸡及某些野禽的疏螺旋体病，表现败血症特征，严重贫血、腹泻、脾肿大2～6倍。但对哺乳动物无致病性。不感染兔、鼠和羔羊。
病原特性和实验诊断方法如下。
1．样品采集 采取发热期的病禽血液或死禽的肝、脾、肺、肾等脏器作为检验样品。但要注意在疾病后期，可能在血液中找不到螺旋体，尸体保存较久，螺旋体也会自行溶解。
2．显微镜检查 典型病禽血液抹片，姬姆萨染色，显微镜检查，一般均可发现疏螺距的螺旋体，从而作出诊断。将血液作悬滴或压滴标本，暗视检查，则可见运动活泼的螺旋体。
3．分离培养 疏螺旋体为革兰氏阴性的厌氧性螺旋体，培养稍困难，于37℃可以生长，应用加有兔肾或心肌组织块的腹水培养最为适宜。在鸡胚的卵黄囊、尿囊腔和绒尿囊膜上，均能良好地生长。因此，将感染血液接种于6日龄鸡胚或火鸡卵黄囊均可分离到螺旋体。一般于接种2～3天后，可在含胚胎血液的尿囊液中发现螺旋体，因为螺旋体主要在胚胎和绒毛尿膜内。
4．动物接种 鸡、鸭、火鸡及野禽均易感染。一般用3～6周龄、幼龄鸡，经肌肉接种，早的在接种后24h，一般为3～5天即可从血液中查出鹅疏螺旋体。
5．血清学试验
(1)琼脂扩散试验 按常规法，用高免血清抗体检测感染器官和感染血液中的鹅疏螺旋体抗原或用胆盐溶解的鹅疏螺旋体抗原，检测感染鹅疏螺旋体病禽的血清抗体，均可诊断。
(2)荧光抗体试验 应用直接荧抗体技术检测病禽组织(肝、脾、肺、肾和脑组织)和血液中的鹅疏螺旋体可以诊断。
二、色勒氏疏螺旋体(Borralia theileri)
色勒氏疏螺旋体致牛、绵羊和马的疏螺旋体病。在病的发热期间，可由血液中查出此螺旋体，但病的后期消失。至今尚无人工培养报告。实验诊断方法参考鹅疏螺旋体。
方登纳染色的固定液、媒染剂和染色液的配制，以及染色方法如下。
(1)固定液 冰醋酸 1ml
福尔马林 10ml
蒸馏水 100ml
将上述前两种成分混合于蒸馏水中即成。
(2)媒染剂 鞣酸 1g
蒸馏水 100ml
将鞣酸溶于蒸馏水即成。
(3)染色液 硝酸银 5g
蒸馏水 100ml
将硝酸银溶于蒸馏水即成。临用前，取硝酸银溶液20ml，慢慢滴加10%氨水，直至形成的褐色沉淀，经摇动后正好完全溶解为止。然后再注加硝酸银溶液几滴，使溶液于摇动后仍呈微浑浊为度。
(4)染色方法
①钓取被检材料，制成薄层涂片在空气中干燥。
②用固定液固定1～2min。
③滴加无水酒精几滴，洗除固定液(如采用动物组织制备的涂片，洗除固定液后，必须用乙醚脱脂，然后用无水酒精洗除乙醚)。
④滴加媒染剂，加热至发生蒸气，约30s。
⑤水洗，滴加染色液，加热至发生蒸气约30s。
⑥水洗、干燥，滴加加拿大树胶，盖上盖玻片封固。
⑦镜检背景为淡褐色，螺旋体呈黑色。
1．酪蛋白胰酶消化物豆胨琼脂(Trypticase soyagar简称TSA)
酪蛋白胰酶消化物(Trypticase) 15g
大豆蛋白胨(Phytone) 5g
氯化钠 5g
琼脂 15g
蒸馏水 1000ml
校正pH7．3，加热溶解，过滤，分装，121℃15min灭菌，在50℃左右，以无菌手续加5～10%的马、牛、绵羊脱纤血制成血液培养基。在此培养基中，再加入壮观霉素(Spectinomycin)400μg／ml即可制成选择培养基，以供分离培养猪痢疾密螺旋体用。
2．酪蛋白胰酶消化物豆胨汤(Trypticase soy Broth简称TSB)
胰酶消化酪蛋白胨 17g
大豆蛋白胨 3g
磷酸氢二钾(K2HPO4) 2．5g
半胱氨酸 0．5g
氯化钠 5g
葡萄糖 2．5g
蒸馏水 1000ml
校正pH7．1，灭菌，使用时的pH为6．9，在40℃左右加入胎牛血清，使之为10%。此培养基供猪痢疾密螺旋体增菌用。