微生物检验材料的采取、保存及送检

出处：按学科分类—农业科学 农业出版社《动物检疫手册》第333页（4247字）

(一)细菌性疾病病料的采取 合理地采取含菌量最多的病料，是做好细菌性疾病确定检疫的第一步。因此，采取病料应了解各病原菌在感染畜禽体内及其分泌物或排泄物中的分布情况。这是因为不同疫病的病原菌在感染畜禽体内的分布情况不同，即使同一种病原菌，在疾病的不同阶段和不同的病型中，其分布也不尽相同。为此，必须根据不同的病情，采取最适宜的病料，才能迅速准确地获得确定检疫结果。各病料的采取方法步骤如下。

1．病畜禽活体的病料采取。

(1)血液。一般应在疾病发作期或发热期采取。用灭菌注射器吸取5%灭菌枸橼酸钠溶液或0．1%肝素1毫升，从被检畜禽静脉(马、牛、羊多为颈静脉，猪多为耳静脉或前腔静脉，禽多为翅静脉)采取血液10毫升，混匀后，注入灭菌试管或灭菌青霉素瓶内，加胶塞封口，贴上标签，迅速送检。被检血液中不应加入任何抗生素或其他抑菌剂，并应采自未经抗生素、磺胺治疗的病畜禽，否则应在病料送检单和瓶签中说明。

(2)口鼻分泌物。一般用灭菌棉拭子从口腔、鼻腔深部或咽部采取分泌物。必要时，可用消毒的食道探子采取咽或食道内分泌物。沾有病料的棉拭子，应立即置入含有少量肉汤或pH7．4的磷酸盐缓冲液的试管内，以防棉拭子干燥而影响检查。

(3)乳汁。先用消毒液(如0．1－0．2%新洁尔灭溶液)清洗并消毒乳房、乳头和挤乳者的手，将挤出的最初的3－4滴乳汁弃去，用灭菌容器采取乳汁10－20毫升，加塞密封，冷藏保存。

(4)脓汁或局部肿胀渗出液。对未破口的肿胀病灶，先在局部剪毛，消毒后，用灭菌注射器抽取脓汁或渗出液。对已破口的肿胀病灶，应消毒破口周围组织，再除去表层脓汁或渗出液后，用无菌棉拭子或纱布，蘸取深部脓汁或渗出液。如浓汁粘稠，先向脓肿内注入灭菌生理盐水后，再抽取，或刀切脓肿吸取。病料采取后，应立即放入灭菌试管或小瓶内，加塞密封。

(5)体腔液、脑脊液、关节囊液等液体。可用穿刺的方法采取。取胸水时，牛、羊在右侧第5肋间或左侧第6肋间，马、猪、狗在右侧第6肋间或左侧第7肋间；穿刺点均在肋骨前缘，胸外静脉上方。取腹水时，牛在右侧腹壁最后肋骨后缘作一垂线，由膝盖骨向前引一水平线，两线的交点与膝盖骨之间的中点处。猪、羊取腹水穿刺点在脐稍前方的白线上或白线两侧。取脑脊液的穿刺点在枕骨大孔或腰荐间隙。抽取的液体，放入有盖的灭菌容器内，立即冷藏和送检。

(6)尿液。用灭菌容器取中段尿。可在自然排尿时采取，也可用导尿管采取，采取的尿液应立即送检，若在室温下放置1小时，即不可供细菌学检查之用。若不能及时检查时，应于4℃冰箱中保存。

(7)生殖道分泌物。可用灭菌棉拭子采取阴道深部或宫颈分泌物，采取后立即放入盛有无菌肉汤等保存液的试管内．冷藏送检。

(8)粪便。先用消毒液擦净肛门周围的污物，再用压舌板插入直肠并轻轻下压，使空气进入直肠刺激排粪，然后用灭菌棉拭子沾取粪便，投入装有少量灭菌缓冲盐溶液的试管内，冷藏送检。

2．死亡畜禽尸体的病料采取。由死亡畜禽尸体采取病料时，应剥去皮肤，打开胸腹腔，以无菌操作采取病料。采取病料的种类，应根据生前发病情况或对疾病的初步诊断印象，有选择地采取相应含菌最多的脏器或内容物。如分不清病的性质或种类时，可全面采取病料。

(1)实质器官。心、肝、脾、肺、肾等实质器官组织，采取有病变的部位，约2立方厘米左右小方块即可，若畜禽小时，可采取完整的器官，分别置于灭菌试管或青霉素瓶中。

(2)淋巴结。采取有病变组织器官邻近的淋巴结。淋巴结应与周围脂肪组织一起采集，并尽可能多取几个。若采取胃肠附近的淋巴结时，需防止胃肠内容物污染。凡污染的淋巴结和病料，应废弃重采。

(3)血液。通常在右心室采取心血。先用烧红的铁片或刀片烙烫心肌表面，然后用灭菌吸管或注射器抽取血液，盛于灭菌的试管或青霉素瓶中。

(4)胆汁。可用灭菌注射器吸取胆汁数毫升，如畜禽小时，可取整个胆囊。

(5)肠管。用线扎紧病变明显处(约5－10厘米)的两端，自扎线外侧剪断，把该段肠管置于灭菌容器中，冷藏送检。

(6)皮肤。采取大约10×10平方厘米的皮肤一块，保存于30%的甘油缓冲溶液中，或10%饱和盐水溶液中。

(7)脑脊髓液及管骨。脑可纵切取其一半，必要时采取部分骨髓或脊髓液。若尸体腐败，可取长骨或肋骨，从骨髓中检查细菌。某些情况下可取整个头。脑及脊髓病料浸入50%甘油盐水中，整个头或骨可包入浸过0．1%升汞溶液的纱布或油布中，冷藏送检。

(8)胎儿。胎儿，小家畜和家禽可将整个尸体包入塑料薄膜中。或采取胎儿胃和内容物及其病变组织。

3．供镜检涂片病料的采取。将脓、血、分泌物等病料，用接种环钓取在玻片上制成涂片，或用玻片沾取病料，在另一玻片上抹涂。组织块，致密结节等，可夹在两张玻片之间，沿水平面向两端推移，制成推压片。用组织块作触片时，持镊子将组织块的游离面，在玻片上轻轻涂抹即可。每份病料制片不少于2－4张。制成的涂片彼此中间夹垫火柴棍或厚纸片，重叠后用线缠住，用纸包好。每片应注明号码，另附说明。

(二)病毒性疾病病料的采取 如从畜禽活体采取病料，必须在发病初期，急性期或发热期，否则，病毒可很快从血液中消失，组织内病毒的滴度也因抗体的产生而迅速下降，无论是从活体上采取病料，还是从死亡尸体上采取病料，既要避免污染，又要防止病毒被灭活。

1．病畜禽活体的病料采取。

(1)血液。可采抗凝血或脱纤血，抗凝剂常用肝素(每10毫升血加入0．1%肝素1毫升)。有时于每毫升血液中加入青、链霉素各1000单位以抑菌防腐。采好的血液放入灭菌容器内密封，在不冻结状态下冷藏送检。

(2)分泌物。鼻液、唾液、眼分泌物用灭菌棉拭子采取。水泡液、脓疱液、组织渗出液用灭菌注射器抽取，或用灭菌毛细管吸取。采取好的分泌物病料，立即投入装有保护液的灭菌容器内密封冷藏送检。保护液常用pH7．4的磷酸缓冲液肉汤，并加双抗。

(3)病皮。水泡皮、痘痂皮等用灭菌剪刀采取后，置于装有保护液的容器内密封冷藏送检。

其他病毒性疾病病料，与细菌性疾病病料的采取方法相同。

2．死亡畜禽尸体的病料采取。由死亡畜禽尸体采取病料，其方法与细菌性疾病病料的采取基本相同。采取的病料分别放入灭菌容器内密封送检。不同的是保存，可以低温冻结保存，或置入装有保护剂的灭菌容器内。常用的保护剂有10%灭活兔血清、10%生理盐水、卵黄液、灭菌脱脂乳以及50%甘油生理盐水等。

(三)病料的保存

1．液体病料。粘液、渗出物、胆汁、血液等，最好收集在灭菌的小试管或青霉素瓶中，密封后用纸或棉花包裹，装入较大的容器中，再装瓶(或盒)送检。

用棉拭蘸取的鼻液、浓汁、粪便等病料，应将每支棉拭剪断或烧断，投入灭菌试管内，立即密封管口，包装送检。

2．实质脏器。在短时间内(夏季不超过20小时，冬季不超过2天)能送到检验单位的，可将病料的容器放在装有冰块的保温瓶内送检。短时间不能送到的，供细菌检查的，放于灭菌流动石蜡或灭菌的30%甘油生理盐水中保存；供病毒检查的，放于灭菌的50%甘油生理盐水中保存。

(四)病料的送检

1．病料采取后应尽快送检，并向装病料的保温容器内放些冰块或冰盐混合物，冰块可保持48小时。如无冰块，可向保温容器内放450－500克氯化铵，加水1500毫升，盖严，可保持零度左右达24小时。

2．不论派专人送或邮送，都必须使病料不污染、不腐败，并包装坚固。瓶上要贴标签，注明病料名称、保存方法、采取日期及地点。航空托运的，要电告检验单位及时提取。

3．如需较长时间才能送到检验单位，为了防止微生物死亡，可将病料接种于小实验动物后送检。

4．送检的病料要有清单、病历、剖检记录及其他有关资料，并说明送检的目的与要求。

主要传染病病料采取、保存、运送见表5－1。

表5－1 微生物病料采取、保存、运送要点

病毒性传染病