尿素酶水解法
出处:按学科分类—农业科学 农业出版社《土壤农化分析手册》第460页(1625字)
(一)适用范围 凡混合有尿素的复合肥料,均可选用本法进行酰胺态氮的测定。尿素酶对尿素具有选择性作用,并使其分解为二氧化碳和氨。因此可用蒸馏法定量此分解出的氨。对含有多量硼的尿素混合肥料,因硼往往有可能干扰尿素酶的作用,而不宜采用本法。各种脲—醛肥料采用本法测定时,为防止此缩合物的加水分解,故在待测液制备时要用中性缓冲溶液来浸提尿素。尿素中的缩二脲虽不为尿素酶作用,但经加热和在碱溶液中有可能要分解成氨。因此应避免长时间蒸馏和在强碱溶液中的测定过程。
(二)试剂配制
1.尿素酶 粉末状,置冰箱中保存。
2.1N盐酸。
3.液体石蜡。
4.磷酸盐缓冲溶液:称取磷酸二氢钾(KH2PO4)3.6g和磷酸氢二钠(Na2HPO4)5.68g溶解于水,稀释至1L。
5.其它试剂同本章第一节蒸馏法。
(三)测定步骤
1.待测液制备
(1)尿素肥料:取经70℃干燥4h的样品,称量0.2-0.5g(精确至0.0001g),溶于水,在l00ml容量瓶中定容。
(2)尿素复(混)合肥料:准确称量0.2-0.5g,于100ml容量瓶中,加水至约80ml,置振荡器上振荡30min后,加水至刻度。
(3)脲—醛肥料和含此肥料的复合肥:准确称取0.2-0.5g,于100ml容量瓶中,加入20℃的磷酸缓冲溶液80ml,置振荡器上振荡30min(浸提时保持20℃),加水至刻度,并立即用干滤纸过滤。
2.待测液测定
(1)尿素:吸取10ml于150ml开氏瓶中,加1N盐酸5-6滴(调节pH=5.6-5.8左右),加入尿素酶0.1-0.2g,摇匀。用橡皮塞塞紧瓶口。于20-25℃室温放置1h或40-45℃烘箱(或水浴)中放置0.5h,使尿素完全分解。冷却后,加入70-80ml水,按图18-1安装于普通定氮蒸馏装置上,做好蒸馏准备后,往开氏瓶中加1g氧化镁及1ml液体石蜡,立即通气蒸馏,蒸馏完毕用0.05N硫酸标准液滴定接受液。同时可对尿素酶进行空白试验,以校正测定结果。
(2)尿素混合或复合肥料:将待测液摇匀,吸取其悬浊液10ml,于150ml开氏瓶中,以甲基红为指示剂,加入稀氢氧化钠溶液中和至红色消失(pH=5.6-5.8)。即可加入尿素酶0.1-0.2g,按上述方法进行尿素水解及蒸馏测定。所得结果为酰胺态氮及铵态氮总量。另外按甲醛法或蒸馏法(不经尿素酶水解)测得铵态氮量。二者之差值即为酰胺态氮量。
(3)脲—醛肥料和含此肥料的复(混)合肥:准确吸取待测液10ml于150ml开氏瓶中,以甲基红为指示剂加入稀盐酸中和至呈现橙色止(pH=5.6-5.8),加入0.1-0.2g尿素酶,按上述方法进行尿素水解及蒸馏定氮,测得含氮总量。如肥料中有铵态氮时,可用蒸馏法测定其含氮量。二者之差即可求出酰胺态氮量。
(四)结果计算 同本节酸水解蒸馏法。本操作取用量倍数为。欲将酰胺态氮折算成含氮量为46%的尿素,可乘以其换算因数2.174,即: