展望
出处:按学科分类—生物科学 农业出版社《植物细胞培养手册》第255页(3834字)
在体外分离突变体的成功受到供试物种组织培养物状况的限制。只有茄科的种,尤其是烟草得到充分的研究。农业上有意义的大多数种还不能利用,例如,玉米愈伤组织已再生植株,但其原生质体再生植株还未见报道。
还没有找到一个种可以作为理想的模式系统。这样的一个组织培养系统需有如下条件:(1)有稳定的单倍体植株或细胞系可供利用;(2)从原生质体,愈伤组织和细胞悬浮培养体能再生植株;(3)相当短的生活周期,即播种可当年开花,这样可以进行遗传分析;(4)有遗传标志的背景可用于遗传分析;和(5)有高频率产生所需突变的选择系统。虽然从单倍体蓝茉莉叶烟草和单倍体Hyoscyamus muticus叶肉原生质体分离到营养缺陷体,但都没有良好的遗传背景进行突变分析,也没有重要的经济意义。在那些进行过广泛的遗传分析的种如玉米、番茄或其他农作物中,组织培养系统还有待于进一步完善。
分离营养缺陷体受到缺乏选择系统的影响。选择不生长的细胞,如在细菌中青霉素选择和真核细胞中的BudR选择,由于杀死了大部分野生型细胞,方便了营养缺陷体的分离。在高等植物(即烟草)BudR富集的一个例子,没有用真正的单倍体。因此这一技术的成功是有限的。在没有选择系统的情况下,也可以通过筛选大量细胞系的办法鉴定营养缺陷体,但这是一个极费力的设想。营养缺陷体分离有赖于发展一个合适的选择系统。
分离营养缺陷体对于高等植物体细胞遗传的充分发展是极为重要。原核生物的许多生化途径及其遗传基础的阐明都用营养缺陷突变体进行推断。在高等植物中,根据营养缺陷细胞系的知识而建立的生化系统,只描述了硝酸还原酶,即硝酸盐营养缺陷体。在营养缺陷细胞系之间的代谢互补,可作为鉴定两种营养缺陷细胞系体细胞杂交的潜在的选择。Glimelius等(1978)用烟草硝酸还原酶突变体证明了这样一种选择的潜在应用。无论是高等植物的生化分析和体细胞杂交都需要许多营养缺陷细胞系。
在高等植物中细胞质遗传的发展有赖于在离体分离细胞质突变体。由于细胞器遗传标志数目有限,每一个新的细胞质突变都扩大了分析细胞器基因组行为的可能性。由于至今只分离到抗极其有限数目的抗菌素的突变体,因此需要新的选择系统。此外,可能需要有效的细胞质诱变剂。已经证明对抗菌素的抗性,在体细胞杂交中选择特殊的细胞质是有用的。
农业研究仅仅理解离体分离突变体未来的应用。初步的研究表明抗病的突变体(如玉米的胡麻斑霉T小种)或抗除草剂的突变体(如抗毒草定烟草)可在组织培养中直接选择。可喜的是某些作物营养缺乏性可以用离体法分离出突变体。例如,用在玉米细胞培养选择抗赖氨酸加苏氨酸的细胞系的方法,已经分离到游离赖氨酸增高的玉米育种选系。
离体突变体在农业上最显着的应用可能是那些直接选择所需的表型。例如,由于高等植物脯氨酸累积通常与胁迫状态(如水分亏缺)有关,或许超量生产脯氨酸的植株会更适应胁迫。抗脯氨酸衍生物突变体已证明超量生产脯氨酸。随着不断设计出间接选择农业上有用表型的方法,离体突变体分离的潜在应用也将会有所理解。
组织培养技术为发展除莠剂抗性植株提供许多方便,如(1)选择技术较快,(2)少量的细胞可代表很大面积田间的遗传潜力,(3)均一的和无菌的条件有利于代谢研究,(4)从植物细胞培养体中可能得到在自然界尚未发现的抗性新类型。但是从培养体筛选抗除莠剂突变体的困难在于变异性的来源、变异性的遗传和代谢基础,以及如何控制它,同时对抗性的代谢机理研究甚少,这些都是需要值得大力研究的问题。
【参考文献】:
〔1〕Chaleff,R.S.1981 Genetics of higher plants.Application of cell culture.Cambridge Univ.Press,Cambridge.
〔2〕Handro,W.1981 Mutagenesis and in vitro selection.In:Plant Tissue Culture.Methods and Applications in Agriculture(T.A.Thorpe,ed.)pp.155-180.Academic Press,New York.
〔3〕Maliga,P.1980 Isolation,characterization and utilization of mutant cell lines in higher plants.In:International Review of Cytology,Suppl.11A,Perspectives in Plant Cell and Tissue Cuiture(I.K.Vasil,ed.)pp.225-251,Academic Press,New York.
〔4〕Sala,F.,Parisi,B.,Cella,R.,and Ciferri,O.(eds.)1980 Plant Cell Cultures:Results and Perspectives,pp.107-187.Elsevier/NorthHoland Biomedical Press,Amsterdam.
〔5〕Chu,I.1982 The use of tissue culture for brceding of herbicide tolerant varieties.In:Potentials of Cell and Tissue Culture Techniques in the Improvement of Cereals.International Rice Research Institute,Philippines, and The Chinese Academy of Science.
〔6〕Mer edith,C.P.and Carlson,P.S.1982 Herbicide resistance in plant cell culture.In:Herbicide Resistance(H.LeBaron and J.Gressel,eds.)pp.275-291.John Wiley and Sons,New York.
〔7〕Dix,P.J.1980 Environmental Stress resistance,Selection and plant cell cultures.In:Plant Cell Culttires:Results and Perspectives(F.Sala,B.Parisi,R.Cella,and O.Ciferri,eds.)pp.183-186.Elsevier/north-Holland Biomedical Press,Amsterdam,New York,and Oxford.
〔8〕Tal,M.,Heiken,H.,and Dehan,K.1978 Salt tolerance in the wild relatives of the Cultivated tomato,Z.Pflanzenphysiol.86:231-240.
〔9〕Levitt,J.1980 Responses of Plants to Environmental Stress,2nd ed.Acade mic Press,New York.
〔10〕Yamada,Y.,Sato,F.,and Hagimori,M.1979 Photoauto trophism in green cultured cells.In:Frontiers of Plant Tissue Culture(T.A.Thorp e.ed.)pp.453-462.IAPTC.Calgary.
〔11〕Yasuda,T.,Hashimoto,T.,Sato,F.,and Yamada,Y.1980.An efficient method of selecting photoautotrophic cell from cultured heterogeneous cell.Plant Cell Physiol.21:929-932.