杧果
出处：按学科分类—生物科学 农业出版社《植物细胞培养手册》第632页（5912字）
杧果是杧果树属，有15种，包括杧果(M．indica L．)，有可供食用果实。可能是多倍体，是异种杂交染色体加倍而产生。染色体数2n=40。种子是多胚的或单胚的。幼年阶段7-10年，嫁接树3-4年后结实。
(一)研究进展
Rao等(1981)描述杧果种子的子叶外植体诱导产生愈伤组织。子叶小片培养在MS加15%CW、4%蔗糖和维生素。在很有限的生长调节剂组合，观察到11．5μM KIN和27μM NAA，22-26℃，暗培，子叶愈伤组织生长反应最好。2周内形成愈伤组织，色深、紧密和颗粒状。几周后愈伤组织形成不定根。愈伤组织继代，器官发生潜势消失不明显。未见芽分化。
Litz等(1982)报道少数多胚性杧果栽培品种的珠心外植体离体培养下体细胞胚的发育。授粉后，40-60天胚珠取出珠心外植体。切取外植体时，球形不定胚与增大的永久性珠心组织相关连。体细胞胚产生于1／2MS主盐类加0．18M蔗糖，2．7mM谷酰胺，0．5mM抗坏血酸和20%(v／v)过滤消毒的CW。证实了珠心和从多胚性杧果的球形、不定胚在固化培养基上能诱导产生胚性愈伤组织，用4．5-9μM2，4-D代换20%CW(Litz等1984)。启动时的愈伤组织是白色，但继代后很快变深棕色。球形愈伤组织很像柑桔愈伤组织的假球茎，尤其是继代在培养液中。液培愈伤组织生长较固培为快。加2，4-D产生体细胞胚胎发生，但体细胞胚发育不超过球形期。将愈伤组织转入无2，4-D培养基后，也产生体细胞胚胎发生。无2，4-D培养基中，体细胞胚发育到成熟。若干多胚性杧果栽培品种曾在人工培养下再生(表24-5)，虽其反应视品种而异。在成熟期间，3-4月内人工培养下体细胞胚长达5-6cm。成熟和发芽难以控制。成熟体细胞胚自发发芽。由于体细胞胚大，接近成熟时易于暴破。这引起逐渐变褐，许多胚在发育期间死亡。另一方式，二次体细胞胚，能从发芽中的胚下胚轴形成。只有极少数植株产生体细胞胚。由此，只有极少数植株从体细胞胚取得。
曾叙述过通过体细胞胚胎发生单胚杧果栽培品种的再生。采用杧果幼果，从胚珠取出合子，抛弃之，切取珠心培养在改进的MS加4．5-13．5μM2，4-D上。经几周后，从珠心形成松、淡色胚性愈伤组织。在2，4-D存在下，产生体细胞胚胎发生，虽然胚发育停留在球形期。不加2，4-D，体细胞胚成熟，但是单胚栽培品种的体细胞胚坏死了。迄今，只有三个栽培品种离体培养再生成功(表24-5)。
表24-5 通过体细胞胚胎发生再生的杧果栽培品种
(二)培养程序
1．体细胞胚胎发生——多胚栽培品种
(1)开花后约20-60天收获杧果，用2%次氯酸钠表面消毒20-30min。无菌蒸馏水充分洗。
(2)在无菌条件下，沿纵轴解剖果实。取出胚珠，纵向对称解剖，珠孔端切取多胚簇，有些栽培品种如Carabao等合子在受精后立即败育，可用胚团为外植体。其它多胚栽培品种，有可能合子胚与不定胚同时存在。合子胚与珠心胚无法区分。
(3)另一方法，取出多胚团簇，用珠心为外植体。珠心厚度视胚珠发育时期而定。待胚囊为胚所充满时，易于取出珠心。
(4)取不定胚和、或珠心培养在培养皿中，装有无菌MS培养基，改进如下：1／2主盐类，0．18M蔗糖，2．7mM谷酰胺，0．5mM抗坏血酸，琼脂8g／l和4．5-9μM 2，4-D。高压蒸气消毒前调节培养基pH到5．8。
(5)培养体保持在25℃，16h光周期，冷白荧光1100-1200lx。
(6)每天取外植体继代在新鲜培养基上，直到外植体停止褐化，正常情况下，珠心将变得很深。
(7)接种3-5周形成胚性愈伤组织。启动时色虽淡，很快变深。愈伤组织可保持在成分相同的固体或液体培养基上。液培生长更快，成为假球茎状。
(8)2，4-D存在时产生体细胞胚胎发生，但是转入不加2，4-D培养基，可使胚发育成熟。
注：单胚栽培品种，在无菌条件下，取出合子胚弃去之。把珠心接种在无菌培养基上。合子胚未充满胚囊的，易从胚珠取出珠心。培养条件同多胚栽培品种。
2．关键变值 多胚杧果栽培品种比单胚的反应较好。多胚性水平最高的比低的反应更好。
(1)外植体 关键是用珠心或珠心产生的胚。茎尖、叶和茎均未成功。这是由于珠心的幼年性，比成年组织，具有较高的形态建成潜势。必需测定取用珠心的最适胚珠发育时期。当单胚栽培品种的合子胚充满胚囊时，很难从胚珠取出珠心。多胚栽培品种可从珠心或从不定珠心胚诱导产生愈伤组织。后者，再生群体可能是合子产生的和珠心产生的植株混合组成。但是，合子败育的杧果栽培品种如Carabao等，所有再生群体将可克隆化。
(2)培养条件 培养基成分有重要性。降低主盐类浓度和相对高浓度蔗糖是有利的。诱导胚性愈伤组织最有效生长调节剂是2，4一D。加还原剂如抗坏血酸，对抗培养基变质的酚类化合物的积存是必要的。活性碳也有效。悬浮培养体加活性碳常能启动体细胞胚胎发生。必需有规律地继代，液培比固体培养基对愈伤组织生长和体细胞胚胎发生更有效。
(三)展望
利用离体培养法于繁殖、遗传改良和种质国际交换前，必须能从体细胞胚有效地产生植株。体细胞遗传法应用于杧果改良有赖于诱导胚性细胞悬浮培养体的有效方法。杧果假球茎愈伤组织虽是高度胚性发生的，不适于研究突变体细胞选择，和原生质体分离和培养。因此，诱导胚性杧果悬浮培养物对将来工作也一定有高度重要性。
应用细胞选择技术于杧果改进，和组织培养产生园艺有用的体细胞无性系变异体，将能改变杧果育种技术。由于异质性和营养繁植杧果栽培品种的幼年期长，常规育种方法不能在短时间内解决最主要逆境。离体培养下选择真菌毒素抗性，使育种家能很快对病害作出反应，而不改变受害栽培品种的基本性质。再生的杧果栽培品种仍需通过幼年期，要经过几年才能测验其对产量或其它园艺特性的影响。但较常规方法改进多年生作物费时较少。
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