胰酶活力的测定

出处：按学科分类—工业技术中国轻工业出版社《皮革工业手册制革分册》第614页（2664字）

胰酶是白色或黄色的无晶形粉末，有微弱的肉类物臭味。在水中能缓缓溶解(但不完全)，不溶于醇或醚中，是从猪、牛、羊等食用动物的胰脏中取得的一种水解酶类，可以促进某些蛋白质的水解反应。在中性或弱碱条件下(pH值为7．8～8．7)活性强，遇到少量无机酸或大量的碱即降低活性，经煮沸则迅速分解而变性。

酶软化是制造软革很重要的操作，如软化液中胰酶浓度过高，皮内胶原纤维损失大，致使成革松面。为了达到正常软化的目的，必须在软化之前，测定其酶的活力，以便正确地确定酶的用量。

1．胰酶的测定原理

胰酶能促进酪蛋白的水解作用，胰酶量越多被水解的酪蛋白也越多。因此，用定量的酪蛋白和不同量的胰酶作用，水解一定时间后，用醋酸盐(或醋酸)指示剂调节反应溶液的pH值到酪蛋白的等电点附近，未被水解的酪蛋白呈白色沉淀析出，而水解产物等则不会沉淀，规定恰好使定量的酪蛋白完全水解的胰酶量为确定活度的依据。根据此时胰酶的体积和浓度，可计算出胰酶对酪蛋白的转化能力(以倍数计)。控制胰酶水解反应最适的条件为pH值8～9，温度为40±1℃。

2．试剂

(1)1．24∶50硼酸水溶液。

(2)0．1mol·L^－1NaOH溶液。

(3)硼酸盐溶液：用1．24∶50的硼酸溶液20mL，再加0．1mol·L^－1NaOH溶液2mL，混合均匀。

(4)13．6%醋酸钠水溶液。

(5)60%醋酸溶液。

(6)醋酸盐缓冲溶液：将13．6%醋酸钠溶液与60%醋酸溶液等体积混合。

(7)酪蛋白溶液：用小烧杯精确称取用研钵研细，且经孔径为0．25mm的筛子筛过的酪蛋白0．2g，加入20mL蒸馏水，用移液管加入0．1mol·L^－1NaOH5mL。将小烧杯连同内容物于40℃水浴上加热约30min。在加热过程中要不断搅拌，使之溶解完全。稍冷，倾入100mL的容量瓶中，并且用蒸馏水将小烧杯洗净移入容量瓶中，再加上5mL1．24∶50硼酸，冷却至室温(25℃以下)并稀释到刻度。

(8)胰酶溶液的制备：用小烧杯精确称待测的胰酶粉末，约0．1g左右(用孔径为2mm的筛子筛过的样品)，将样品倾入玻璃研钵中加1mL硼酸盐溶液洗涤小烧杯，其溶液倾入玻璃研钵中，浸泡3～5min后，轻轻研磨直到胰酶溶液为粘稠粥状没有大块胰酶为止。将研钵及小烧杯内的胰酶全部倾入500mL容量瓶中，分次以少量蒸馏水冲洗研钵，洗液并入容量瓶内，稀释，使之在25℃以下定容至刻度。

3．操作

取标有号码的刻度试管7支，各精确加入酪蛋白溶液5mL，然后按号码依次加入胰酶被测溶液4．0、3．5、3．0、2．5、2．0、1．5、1．0mL，将各管用蒸馏水稀释至10mL，充分摇匀，各试管同时浸入40℃水浴中，使水面高于管内液面，保持恒温，1h后将试管全部取出，同时各管逐滴加入醋酸盐缓冲液0．5mL，在透射光下仔细观察当缓冲液加入时，顺着指示剂下去的类似丝状的溶液是否转为白色，注意此时不要摇动试管。如果缓冲液到了试管底部还未出现沉淀，说明酪蛋白已被水解完全；缓冲液滴下去时呈现白色，说明酪蛋白未被全部水解，以含胰酶被测溶液量最少，而溶液完全清亮的试管为终点记下该管中的胰酶毫升数U2。

再进行精确测定。可再取6支试管，各加入5mL酪蛋白溶液，然后按号码顺序加入胰酶。若以上测定终点管中含胰酶为2．0mL，则精确测定时各管依次加入胰酶量为1．5、1．6、1．7、1．8、1．9、2．0mL，以下操作同上。

4．计算

胰酶的蛋白转化力，亦称活度。计算如下：

1g胰酶转化酪蛋白的克数X(倍数)