蛇胆汁 川贝母
出处：按学科分类—医药、卫生 军事医学科学出版社《对药的化学、药理与临床》第430页（12656字）
【中医理论】
蛇胆汁100g，川贝母600g，为散，《中国药典》2000年版一部有载，名蛇胆川贝散，有清肺，止咳，除痰之功。蛇胆汁苦寒清热解毒，川贝母苦凉化痰止咳，二味相辅为伍，最适用于肺热咳嗽痰多之症，故为临床常用之品。
【化学研究】
1．蛇胆川贝散样品制备
处方：蛇胆100g，川贝母600g，制法：以上二味，川贝母粉碎成细粉，与蛇胆汁混匀，干燥，粉碎，过筛，即得［1］。
2．显微鉴别
取本品，置显微镜下观察：淀粉粒广卵形或贝壳形，直径40～60μm，脐点短缝状、人字状或马蹄状，层纹可察见［1］。
3．蛇胆汁川贝散中蛇胆汁和牛磺胆酸钠的薄层色谱鉴别方法
方法1：取本品3g，加氯仿-乙醇(7∶3)混合液20ml，摇匀，加热20min，时时振摇，过滤，滤液蒸干，残渣加乙醇2ml使溶解，作为供试品溶液。另取蛇胆汁对照药材，加乙醇制成每1ml含5mg的溶液，作为对照药材溶液。再取牛磺胆酸钠对照品，加乙醇制成每1ml含0．5mg的溶液，作为对照品溶液。照薄层色谱法(附录ⅥB)试验，吸取上述三种溶液各5μl，分别点于同一硅胶G薄层板上，以异戊醇-冰醋酸-水(9∶3∶1)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以10%硫酸乙醇溶液，于105℃加热至斑点显色清晰，置紫外光灯(365nm)下检视。供试品色谱中，分别在与对照药材色谱和对照品色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点［1］。
方法2：取本品3g，加甲醇10ml，置水浴上回流30min，滤过，滤液浓缩至1ml，作为供试品溶液。另取蛇胆汁对照药材2mg，加甲醇1ml使溶解，作为对照药材溶液。照薄层色谱法试验，吸收上述两种溶液各10μl，分别点于同一含羧甲基纤维素钠为粘合剂的硅胶G薄层板上，以异戊醇-水醋酸-水(18∶10∶6)为展开剂，展开，取出，晾干，喷以30%硫酸乙醇溶液，在105℃烘约10min，置紫外光灯(254nm)下检视。供试品色谱中，在与对照药材色谱相应的位置上，显相同颜色的荧光斑点［2］。
4．蛇胆汁川贝散中胆酸的定量分析［3］
4．1比色法
供试品溶液的制备：精密称取蛇胆川贝散2g，于索氏提取器中，加乙醇80ml，回流提取5h，提取液定量转移至蒸发皿中，水浴挥去乙醇，残留物用60%醋酸溶解，定量移入25ml量瓶中，定容，摇匀，过滤，弃去初滤液，取续滤液为供试品溶液。
对照品溶液的制备：精密称取胆酸对照品12．5mg，置25ml量瓶中，加入60%醋酸溶解并稀释至刻度，摇匀，即得。
标准曲线的制备：精密吸取对照品溶液0．0、0．2、0．4、0．6、0．8、1．0ml，分别置带塞试管中，各管精密加入60%冰醋酸至1．0ml，各管加入新制的糠醛水溶液(1→100)1．0ml，于水浴中放置5min，加硫酸溶液(取硫酸50ml与水65ml混合而成)13ml，摇匀，置70℃水浴中加热10min，迅速移至冰浴中放置2min，以第一管为空白，在620nm波长处测定各管的吸收度值。以吸收度值为纵坐标，相应的胆酸浓度为横坐标，进行回归处理，得回归方程：Y=0．1082X－0．0166，r=0．9992。
回收率试验：精密称取已知胆酸含量的样品约2g，定量加入胆酸对照品，然后按供试品溶液制备项下的方法操作，制备待测液，依法测定其中胆酸的含量，计算回收率，结果为98%。
样品测定：精密吸取供试品溶液各10ml，分置甲、乙两支带塞试管中，甲管加新制糠醛水溶液(1→100)1．0ml，乙管加水1．0ml代替糠醛，然后按标准曲线制备项下的方法，自“在冰浴中放置5min”起依法操作，以乙管为空白，在620nm波长处测定甲管的吸收度值。将测得吸收度值代入回归方程，求出甲管中胆碱的浓度，根据样品取样量及供试品溶液制备过程即可计算出样品中胆酸的含量，结果见表10－35－1。
表10－35－1 蛇胆川散中胆酸的测定结果
4．2 HPLC法
标准溶液的配制：精密称取胆酸标准品5mg，用甲醇溶解并定容至25ml。内标液的配制：精密称取苯丙酸诺龙10mg，用乙腈加热溶解并定容至25ml。试液的配制：称取18－冠醚－610mg，1－溴乙酰基对硝基苯60mg分别置于10ml容量瓶中，用乙腈溶解并定容。称取氢氧化钾100mg，置100ml容量瓶中，用甲醇溶解后定容。
精密吸取胆酸标准液或已处理好的样品液适量于反应瓶中，加氢氧化钾溶液200μl，蒸干。在干燥的环境中冷却(烘箱里自然冷却或干燥器中冷却)，先加18－冠醚－6，再加1－溴乙酰基对硝基苯试液各200μl，密塞，立即放入已恒温至60℃的烘箱中加热60min，取出冷却后即可进样，进样量10μl。
选用流动相为甲醇-水(80∶20)，说明衍生试剂峰不干扰样品的测定。在胆酸位置无其他干涉物质峰。在上述色谱条件下，胆酸的保留时间13．1min，内标苯丙酸诺龙的保留时间24．0min。
精密吸取胆酸标准液100、200、300、400、500、600μl，分别置于不同的反应瓶瓶中，各加氢氧化钾试剂200μl，蒸干后冷却，分别加催化剂和衍生化试剂各200μl，于已恒温至60℃的烘箱中加热40min，冷却至室温后加苯丙酸诺龙内标液各200μl，然后依次进样10μl。胆酸的峰高11x，苯丙酸诺龙的峰高hs，以hx／hs(A)对进样μg数(W)的回归，得回归方程：A=0．729W+0．0486，r=0．999。回归方程线性良好，并基本通过原点，故样品测定用比较法，最小检测量30ng。
精密吸取蛇胆川贝液20ml，置60ml分液漏斗，用氯仿提取5次(20、20、15、10、10mI)。合并氯仿液，置水浴上回收氯仿后蒸干，残渣用甲醇适量溶解，转移至10ml容量瓶中，用甲醇定容。精密吸取上述处理的样品液4ml于反应瓶中，加氢氧化钾试液200μl，蒸干。加催化剂和衍生化剂各200μl，密塞，有60℃烘箱中加热40min，冷却后加200μl内标液，进样，对照品胆酸同时测定，见表10－35－2。
表10－35－2 含量测定结果(n=5)
回收率的测定：胆酸氯仿溶液的配制：精密称取胆酸2mg于100ml容量瓶中，加适量的氯仿并超声振荡，使胆酸完全溶解，用氯仿定容。精密吸取蛇胆川贝液10ml和20ml，分别置2个分液漏斗中，各加入胆酸氯仿标准液2ml，然后用氯仿萃取(方法同样品提取部分)。从已处理好的提取液中各吸4ml于反应瓶中，进行衍生化反应后进样，适量的对照品胆酸标准液同时测定，用内标法计算回收率，结果平均回收率为99．8%，RSD为1．5%［4］。
4．3反相高效液相法［5］
HPLC条件：色谱柱为YWG-C18，10μm(Φ4×250mm)；室温；蛇胆汁测定采用流动相为30%乙腈水溶液，15%磷酸调pH=3；流速0．8ml／min；检测器灵敏度0．04AUFS，蛇胆川贝液采用流动相28%乙腈水溶液，15%磷酸调pH=3；流速1．0ml／min，检测器灵敏度0．2AUFS；λ检=210nm；试验方法为外标法。
标准溶液的制备：分别准确称取经五氧化二磷真空干燥至恒重的牛磺胆酸钠标准品40mg和30mg，用蒸馏水溶解定容至50ml，摇匀密封冷存，作为胆汁及蛇胆川贝液测定所需。
样品溶液的制备：胆汁测定：取体积比1∶1的胆汁和酒，混匀，离心。准确量取上清液1ml，用95%的乙醇稀释定容至50ml，放置，0．45μm的滤膜过滤，得供试液。
蛇胆川贝液测定，准确量取20ml蛇胆川贝液样品置分液漏斗中，分别加入20ml，15ml乙醚，分二次萃取，醚层分别用5ml水洗涤2次。合并水层，在水浴上蒸发至水层无醚味，放冷后备用。称取2．5g经丙酮回流，乙醇浸泡处理的D101型大孔树脂，水装柱，将备用的样品全部上柱。先用200ml蒸馏水洗脱，再用95%乙醇60ml洗脱，收集乙醇液于蒸发皿中，置水浴上蒸干，残渣加95%乙醇溶解于5ml容量瓶中，定容摇匀，0．45μm滤膜过滤，作供试液。
加样回收试验溶液的制备：蛇胆汁测定：取1∶1(V／V)混匀的胆汁，离心。准确量取上清液0．5ml，再加入准确量取的牛磺胆酸钠标准溶液5ml，用95%乙醇定容至25ml，摇匀，放置后滤膜过滤，得供试液。蛇胆川贝液测定：准确量取20ml样品置分液漏斗中，再加入准确量取的牛磺胆酸钠标准品2ml，以下按样品溶液的制备“分别加入20ml，15ml乙醚……”操作，处理得溶液为供试液。
实验结果：样品峰面积与浓度的关系：分别量取上述标准溶液0．1、0．3、0．5、0．7、0．9ml，蒸馏水分别定容至2ml，摇匀。取20μl进样，记录色谱图，测出峰面积为纵坐标，相应的浓度为横坐标，进行线性回归。回归方程：Y=－580．8+61540．1X，r=0．9998，呈良好的线性关系。
加样回收试验：蛇胆汁及蛇胆川贝液测定：分别取牛磺胆酸钠标准品溶液20μl，10μl进样，测得F因子。再分别取上述加料回收试验溶液20μl，10μl进样，计算加料回收率，结果见表10－35－3，表10－35－4。
表10－35－3 蛇胆汁的加料回收率
表10－35－4 蛇胆川贝液的加样回收率
样品测定：取上述蛇胆汁样品溶液20μl和蛇胆川贝液样品溶液10μl，进样，记录色谱图。测定了一些商品蛇胆汁的牛磺胆酸含量，并与硫酸-糠醛比色法和薄层扫描法结果进行比较。见表10－35－5。标本蛇胆及蛇胆川贝液的牛磺胆酸含量结果分别见表10－35－6，表19－35－7。表中所测牛磺胆酸的含量是以牛磺胆酸钠计的含量。
表10－35－5 3种方法含量测定结果(mg／ml)
表10－35－6 几种标本蛇胆汁中牛磺胆酸的含量(mg／m1)
表10－35－7 蛇胆川贝液中牛磺胆酸含量测定结果(mg／m1)
另有多篇关于蛇胆川贝液中胆酸、川贝中生物碱或贝母甲素，贝母乙素的成分分析及定量分析研究的报道［6～12］，由于蛇胆川贝液的组方与蛇胆川散有所不同，因此在此不作累述。
5．稳定性研究
丁氏等［13］根据胆酸在糠醛液及硫酸液中显色反应，并在605±1nm处有最大吸收的原理，用此法来测定蛇胆川贝液的胆酸含量。并对样品采用恒温加速实验法，根据不同温度时的初速度及一级反应的动力学方程式，求得其胆酸的有效期，取得较正确结果。
样品处理：取蛇胆川贝液若干支分别置恒温水浴锅内加热恒温，加热终止，取出样品，立即冷却备用。
测定波长选择：依据方法，准确吸取蛇胆川贝液50ml，置150ml分液漏斗，用氯仿提取3次，每次30ml，合并氯仿液，水浴蒸干，冷却加50%醋酸定容于25ml量瓶中。准确吸取溶液1ml加1ml1%新制糠醛液，冰浴5min，加入13ml硫酸液，于70℃水浴10min，于冰浴冷却2min，取出于450～700nm范围内扫描，在605±1nm波长处有最大吸收，未见其他干扰峰，故选择样品液在此波长下测定。
样品液的制备：准确吸取恒温后的蛇胆川贝液50ml，按“测定波长选择”项下的方法制得样品液。
干扰试验：按蛇胆川贝液处方及工艺，配制不含胆酸的“蛇胆川贝阴性液”按“测定波长选择”项的方法制得供试液，以蒸馏水为空白，于605nm处进行测定，结果无吸收，表明该法不受样品中其他成分的干扰。
测定样品液的稳定性实验：精密取样品液1ml，按“测定波长选择”项下的方法制得液体，在室温下放置不同时间测定吸收度，结果在1h内无变化。
样品液测定：精密吸取样品液1ml，以蒸馏水为空白在605nm处测定吸收度，结果见表10－35－8。
表10－35－8 蛇胆川贝液中胆酸的测定结果
数据处理模型：按下式计算不同温度时的平均速度(简称初速度)。
。Ao为室温下的吸收度，Ai为不同温度下对应的时间(h)，i=1，2，3，……M。Vo，i分别取自然对数，以InV。．i，对1／T0作Arrhenius图，求出直线相关系数r。建立直线回归方程InVi=a+b／Ti，再根据Anhenius公式InKi=1nA-E／RT，求出活化能E，该公式中R为气体常数8．314J·mol－1·K－1。
按Arrhenius图，将1／t外推至1／298，求得室温下的lnv，查反对数求得V298K，即K298K。根据一级反应的动力学方程式，分别求出消耗10%、0%、30%所需时间t0．9、t0．8、t07。
作Arrhenius图。建立直线回归方程Inv=－12870．3／T+31．73，求得直线相关系数=｜r｜=0．9989，活化能E=107．004k·J·mol－1。则蛇胆川贝液中胆酸的稳定性：t0．9=2．12a，t0，8=1．49a，t0．7=7．18a。
丁青龙等还报道了用单测点法预测蛇胆川贝液的稳定性［14］。
【药理研究】
1．对中枢的作用
蛇胆川贝液主要成分为蛇胆汁，川贝和杏仁水，临床应用发现有明显的催眠作用，经实验研究表明，其对中枢有明显的抑制作用，能明显减少小鼠自主活动次数，明显延长土的宁引起的小鼠惊厥及死亡时间，这种药理作用，对于因感冒发现并伴有痰多，咳嗽的病人，起到良好的治疗效果［15］。
3．抗菌作用
李氏等［17］对宁夏贝母总碱和蛇胆川贝液进行了体外抗菌活性研究，用Kirby-Beuer纸片扩散法和琼脂稀释法做金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、肺炎克霉伯氏菌、肺炎球菌及乙型溶血性链球菌的药物敏感性试验。结果：宁夏贝母总生物碱对肺炎球菌的MIC是0．25mg／ml，表明对肺炎球菌有抗菌活性。蛇胆川贝液在稀释度为原液和1∶10时，对乙型溶血性链球菌的的抑菌圈直径为24和12mm。
【毒理研究】
实验结果表明三蛇胆川贝末对小鼠最大耐受量为15．6g／kg，为人日用量300倍，安全度大［16］。
【临床应用】
1．治疗咳嗽
陈氏［18］观察气管炎咳嗽病例120例，男75例，女15例，年龄2～82岁，平均50岁。
用药方法：三蛇胆川贝末系由金环蛇、银环蛇及之眼镜蛇三蛇胆与川贝粉末研制而成。蛇胆每支0．65g。口服给药，每日3次，每次1～2次支，每天或隔日观察1次，7～10d结束疗程。用药期间停用一切解痉、镇咳、化痰、止咳类药物。于服药前及服药后1～10d，每天记录其自觉症状、咳嗽、咳痰、呼吸次数、体温、肺部啰音等情况，前后对照作评价，10d内已显效者即予结束观察。并选择25例测定肺活量、肺血图结果作前后对照，给予评价。
病例选择：以全国慢性支气管炎专业会议修订之标准，选择慢性支气管炎风热痰热型之患者及按实用内科学诊断标准选择急性气管炎患者。总体评价：显效：临床症状消失或改善，咳嗽、咳痰明显减少，肺部啰音明显吸收，肺血图改善。有效：咳嗽、咳痰均减少，肺部啰音有所吸收。无效：咳嗽、咳痰无改变。恶化：咳嗽、咳痰加重，痰难咯出。
单项评价：显效：从重到轻或减少++及++以上。有效：有改善。无效：无改善。恶化：加重。总体疗效：120例中显效55例，占45．83%；有效62例，占51．66%；无效3例，占2．5%；总有效率为97．5%。
单项疗效：肺部透视结果：120例中服药前后有对照者20例，其中1例加服抗生素者不作统计19例中显效11例，占57．89%；有效6例，占31．57%；无效2例，占10．53%；总有效率为89．47%。
止咳效应：用药后12h咳嗽程度开始减轻，从持续或痉挛性减为阵发性非痉挛性，服药后第3～4d明显减少。
表10－35－9 统计评价
化痰效应：用药后12h开始，痰较易咯出，24h开始，痰粘稠度减少，痰液变稀，痰量增加，服药3～4d后痰量逐渐减少。
止喘效应：与咳嗽减轻及痰易咯出的同时，气喘亦于服药后24h开始缓解，第3d逐渐消失。
对肺部啰音的影响：肺部啰音的产生是由于炎症引起支气管粘膜被刺激，管壁受损害，纤毛活动受限，腔内炎症渗出，腺体分泌增多，呼吸时气流通过困难所致，随着痰液排出，管腔畅通，啰音消失。
对肺活量的影响：25例中服药前肺活量明显下降者23例，服药后均有不同程度提高，提高幅度为50～80ml平均提高397．8ml，P＜0．001。
有减轻肺循环内压，缩短Q－J间期作用：Q－J间期相当于右心射血前期，当患有慢支、肺气肿及急性肺部疾患时，肺循环高压，Q－J间期可延长，本组25例中服药前后有对照者20例，服药后有不同程度缩短者19例，1例无效，缩短幅度为0～0．04s，平均缩短0．021s，P＜0．01。
延长肺血图充盈时间，改善肺部血循环：20例服药后前后对照延长幅度为0～0．08s，平均延长0．03s，P＜0．01。
对肺血图波幅的影响：主波(HZ)的高度是肺循环动、静脉在心脏心缩期决的容量波动差，于肺动脉高压，肺血管受损，肺组织炎变等均使HZ波幅变小，随着肺组织功能恢复及肺血管容量改善，则HZ波幅增大。本组前后有对照者20例，服药后显效6例，占30%，有效13例，占65%，无效1例占5%，前后变化幅度从0～0．16欧姆，平均增大幅度为0．081欧姆，P＜0．01。
副反应：120例中出现口淡者5例，停药后消失，余未见其它毒副反应。
有报道用蛇胆川贝液，共治疗51例咳嗽患者，其中男26例，女25例。年龄1岁以下15例，1～3岁20例，4岁以上16例。病程1周以内30例，1周以上21例。病程：支气管炎41例，肺炎10例。中医辨证：风热咳嗽30例，雍热闭肺咳嗽21例。选用晶体管超声雾化器按使用说明进行操作，将面罩对准咽部，使其达到最佳效果。一次量用鱼腥草注射液10ml，蛇胆川贝液10ml，蒸馏水10ml。每次吸入15min，bid，3d为1个疗程。本组病例在治疗期间，停用其他药物。用药最少3次，最多10次，平均3次有效。治愈30例，好转15例，无效6例［19］。
2．治疗肺炎［20］
观察组100例，男68例，女32例，年龄～6个月19例，6～1岁30例，1～2岁30例，2～3岁21例。对照组80例，男45例，女35例；年龄～6个月15例，6～1岁20例，1～2岁25例，2～3岁20例。
治疗方法：对照组80例均采用肺炎常规疗法(抗生素、止咳、激素、吸氧等)。观察组100例，在对照组治疗的基础上加用蛇胆川贝液口服。用量6个月0．5ml／次，7个月～1岁1．0ml／次，1～2岁／1～2md次，3～4岁3～4ml／次，1日2次(痰多者3次)，连用5～7d。
治疗结果：显效：用药后2～4d内咳喘明显减轻，痰量明显减少，肺部听诊喘鸣音及痰鸣音明显减少或消失。观察组35例；对照组18例。有效：用药后5～7d内咳嗽喘减轻，痰量减少，肺部听诊喘鸣音及痰鸣音减少或消失。观察组50例，对照组37例。无效：用药7d以上，证状体征无改善，观察组15例，对照组25例。观察组总有效率85%；对照组总有效率67．5%。结果表明，应用蛇胆川贝液辅佐治疗小儿肺炎的有效率明显优于单纯西药组。
【不良反应】
1．引起过敏反应
1．1 引起胸闷虚脱［21］
张某，男，50岁。1989年10月4日因头昏头痛、咳嗽有痰，服蛇胆川贝液1支后，感胸闷、心悸、发热，出汗。自疑与服该药有关，停服后症状消失。1个月后，再次因咳嗽服用该药，出现与前次相同症状，来门诊时，症状已消失。改服维生素C，银翘片(南昌桑海制药厂产)及必嗽平。感冒愈，未再出现胸闷、心悸、发热等症状。
1．2 引起药物疹［21，22］
吉某，男，27岁。1990年1月4日因感冒咳嗽服蛇胆川贝液后感全身不适，低热，次日早晨两颞部出现对称性红斑，直径2．5cm，微痒。来本门诊部予赛庚定2mg，每日3次；氯氟舒松软膏作用，5d后红斑消失。
以上2例在家自服蛇胆川贝液时，均未服用其他药物，所有症状，在停药或经抗过敏治疗后消失，故属蛇胆川贝液过敏无疑，其主要致敏原可能为蛇胆。
徐某，女，26岁。来诊前25min因咽部不适、咳嗽自服蛇胆川贝液1支，服后5min突然出现全身皮肤潮红，灼热瘙痒，尤以颈、面部为甚，继而全身皮肤出现疹块奇痒。查体：痛苦表情，体温36．5℃，脉搏86次／min、呼吸18次／min、血压16／10．7kPa，头皮贝边缘不清多量的红色丘疹，双眼睑及口唇肿胀、球结膜充血，流泪。咽部轻度充血，扁桃体无肿大，心音钝、律整、心率86次／min、双肺呼吸音咯粗糙，未闻及干湿性啰音，腹部未见异常。化验室检查：白细胞8．6×109／L，E8。临床诊断：蛇胆川贝液过敏；上呼吸道感染。给予苯海拉明20mg肌注，5%葡萄糖加地塞米松10mg静点，板蓝根冲剂1袋，每日2次口服，停用蛇胆川贝液，次日皮疹逐渐消退，连续用药4d，诸证悉除；皮疹全部消退，病告痊愈。
2．有违辨证致久咳不愈［23］
朱氏观察病人自购服用蛇胆川贝液，因有违辨证，致使咳嗽顽久不愈3例。
4．引起急性喉水肿［24］
【禁忌】
风寒咳嗽痰湿犯肺，身体素弱时咳嗽，或久咳不已，大便溏泄者忌滥用［25］。
【参考文献】：
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16 田育望，王克美，兰芳．蛇胆川贝液镇咳祛痰平喘作用的研究．中成药，1993；15(3)：28
17 李阳，黎雪如，周妊．宁夏贝母碱和蛇胆川贝液体外抗菌活性研究．宁夏医学杂志，1996；18(3)：147
18 陈珠，黄鎏昌，翁明翰．三蛇胆川贝末治疗气管炎咳嗽的临床药效观察(附120例报告)．中药药理与临床，1987；3(2)：57
19 裴振帮，关艳．鱼腥草注射液和蛇胆川贝液雾化吸入止咳疗效观察．中国医药学杂志，1995；15(3)：114
20 高宝贵，朱云．蛇胆川贝液辅佐治疗小儿肺炎疗效显着．吉林中医药，1991；(4)：34
21 陈玉佩．蛇胆川贝液口服过敏2例．四川中医，1992；(9)：26
22 杨树光．蛇胆川贝液致过敏反应1例．北京中医杂志，1992；(2)：54
23 朱士伏．蛇胆川贝液致久咳不愈救误3例．新疆中医药，1995；(4)：50
24 王豫胃．蛇胆川贝液致急性喉水肿1例．药物流行病学杂志，1993；2(2)：71
25 初燕生．蛇胆川贝液不可滥用．中医药信息，1990；7(3)：46