黄瓜、豇豆和土壤中残留量检测方法(方法二)
出处:按学科分类—农业科学 中国农业出版社《农药残留量实用检测方法手册第3卷》第6页(2354字)
安徽化工研究院化工部农药工程技术中心 王美瑜 李占山 陈引风
样本用丙酮水溶液提取,石油醚/乙腈液-液分配,衍生化,液相色谱法(FD)测定。
1.主要仪器及设备
液相色谱仪 荧光检测器(FD)
匀浆机
旋转蒸发器
恒温水浴锅
2.主要试剂
丙酮、乙腈、石油醚、氯化钠、28%氨水、N,N-二甲基甲酰胺、1-甲基咪唑、三氟乙酸酐、二甲基二氯硅烷
阿维菌素标准品
3.检测步骤
3.1 提取
3.1.1 黄瓜、豇豆
称取200g切碎的样本,匀浆后取20g,加100mL1∶1丙酮水溶液,振荡提取2h。静置、过滤,用100mL1∶1丙酮水溶液分数次洗涤滤渣,过滤。合并滤液。
3.1.2 土壤
称取20g样品于250mL三角烧瓶中,加100mL1∶1丙酮水溶液,浸泡过夜,超声波振荡提取10min。静止沉降,过滤上清液。用50mL1∶1丙酮水溶液洗涤滤渣,抽滤。合并滤液。
3.2 净化
将滤液移至500mL分液漏斗中,加10g氯化钠,用50mL×2石油醚萃取,每次1min,弃去水相。合并石油醚相,用50mL×2乙腈液-液分配,弃去石油醚相。在乙腈相中加入200mL水和5g氯化钠,用50mL×2石油醚萃取,合并石油醚相,经5g无水硫酸钠柱脱水后,用旋转蒸发器(65℃)浓缩至近干。用6mL石油醚分3次溶解残余物并转移至经硅烷化处理的具塞刻度试管中。
3.3 衍生化
3.3.1 衍生化试剂配制
衍生化试剂A:10mL具塞刻度试管中加入3.6mLN,N-二甲基甲酰胺,再加入0.4mL1-甲基咪唑,混匀。放入水浴中冷却2min后,缓缓加入0.6mL三氟乙酸酐,摇匀。本试剂在每次衍生化时需重新配制。
衍生化试剂B:在5mL具塞刻度试管中加入3.0mL甲醇,而后加入0.2mL28%氨水,摇匀备用。
3.3.2 衍生化反应
将样品置于65℃油浴上蒸干,加入0.2mL衍生化试剂A,充分摇动后,置于30℃油浴上反应1h,并不时摇动。取出后,再向其中加入0.1mL衍生化试剂B,摇匀。置于30℃油浴上反应30min,冷却至室温。加入1.0mL甲醇、2.0mL水、2.0mL乙酸乙酯后摇匀。分层后取乙酸乙酯层用液相色谱法测定。阿维菌素标样系列与样品同时衍生化。
3.4 液相色谱法测定
检测器 FD
波长 Ex365nm,Em475nm
色谱柱 Hypereil,100mm×2.1mm
柱温 40℃
流动相 甲醇/水(95∶5,V/V)
流速 0.6mL/min
进样量 10μL
保留时间 2.1min
4.结果计算
外标(峰面积)-标准曲线法定量
5.灵敏度、准确度和精确度
最小检出量 1×10-10g。
最低检测浓度 黄瓜、豇豆和土壤均为0.001mg/kg。
回收率 黄瓜、豇豆、土壤中添加阿维菌素0.005~0.10mg/kg时,平均回收率为82.2%~94.4%。见表1-1-2。
相对标准偏差 3.2%~10.1%,见表1-1-2。
表1-1-2 黄瓜、豇豆和土壤中阿维菌素添加回收率及相对标准偏差实验结果
6.黄瓜、豇豆和土壤中阿维菌素液相色谱测定谱图
见图1-1-2。
图1-1-2 黄瓜、豇豆和土壤中阿维菌素液相色谱测定谱图