细菌的鉴定法

出处：按学科分类—农业科学 中国农业出版社《鸡病诊断技术手册》第96页（3185字）

细菌的细菌学鉴定通常包括培养特性的鉴定和生化特性的鉴定。

培养特性的检查是系统检查细菌不可缺少的一个重要方面。最常用的项目是检查细菌在培养基上的生长表现。将纯培养菌接种于培养基上，放于37℃温箱中24－48小时或再长一些时间，或放于25℃(病原真菌)中4－5日或再长一些时间，然后，观察细菌在培养基上的生长表现，观察菌落的特征，包括菌落的形状、大小、颜色、湿润度、隆起度、透明度、表面及边缘等。不少细菌在固体培养基上所形成的菌落有其特征，所以有一定的鉴别意义。

细菌在含有一定化合物的培养基中生长后，由于细菌的分解和合成作用，可使该物质转化为其他物质；产物的性质随细菌种类不同而异，可借助于化学方法测定出来，这种方法称为细菌的生化特性检查法。细菌的生化试验内容很多，在实际工作中，应先估计分离的细菌有可能是哪一种细菌，然后再进行相应的生化项目检查，而不是无目的进行许多生化试验项目鉴定。这里只介绍最常用的几种试验如下：

(1)糖发酵试验

【培养基】糖发酵培养基。

【方法】挑取待测的菌种，接种在糖发酵培养基上，于37℃下培养24－72小时，有的要培养一周，每天观察，产酸者即改变颜色，产气者即有气体阻留在倒立的发酵管内(产酸+，产酸产气，不变化－)。

(2)吲哚(靛基质)试验

【培养基】蛋白胨水。

【方法】取待测菌接种在蛋白胨水中，37℃培养1－2天，向培养物中慢慢加入0．5－1毫升2%对位二甲基氨基苯甲醛的酒精液，不要摇动，使其成明显的两层，再慢慢滴加浓盐酸数滴，注意观察培养物与试剂交接面上的变化，呈红色者为阳性反应，有吲哚产生，无变化者为阴性反应。

(3)甲基红试验

【培养基】葡萄糖蛋白胨水。

【方法】将纯培养菌接种于葡萄糖蛋白胨水中，培养4－5天后加试剂(取甲基红0．1克，溶于95%酒精300毫升中，再加蒸馏水200毫升即成)1－2滴于培养物3．0毫升中，呈红色者为阳性反应，呈黄色者为阴性。

(4)V－P试验

【培养基】葡萄糖蛋白胨液。

【方法】

①取2－4天培养物2．0毫升，先加6%甲萘酚酒精液1．0毫升，再加40%氢氧化钾液0．4毫升，充分摇动试管，在4小时内出现深红色或红色者为阳性反应，如为阴性反应可放在37℃中4小时再进行观察。

②取2－4天的培养物1毫升，加0．1毫升试剂(取40克KOH溶于100毫升水中，最后加0．3克肌酐)。置50℃水浴2小时，或37℃4小时，充分摇动试管，观察结果。出现红色或伊红色者为阳性反应。

(5)枸橼酸盐利用试验

【培养基】西蒙氏枸橼酸盐培养基。

【方法】轻轻刮取固体培养基上的菌落，放入0．5－1．0毫升盐水中，制成悬液，然后，取1环接种在培养基斜面上，37℃培养2－4天，培养基变碱者为蓝色，是阳性反应。

(6)硝酸盐还原试验

【培养基】硝酸盐培养基

【方法】将细菌接种在培养基中，培养1－4天，加入试剂Ⅰ〔甲萘胺0．5克及5N醋酸(冰醋酸1份加水2．5份)100毫升〕及试剂Ⅱ〔氨苯磺酸0．8克及5N醋酸100毫升〕各2滴(等量)，如呈红色者为阳性反应。

(7)硫化氢试验

【培养基】醋酸铝琼脂。

【方法】

①取细菌穿刺接种于醋酸铝琼脂内。于37℃培养1－2天，如沿穿刺线有黑褐色者，即为硫化氢阳性反应。

②将细菌接种肉汤或蛋白胨水内，并将浸有醋酸铅的滤纸条放入管口内与棉塞之间(滤纸条事先浸入醋酸铝饱和液。并干燥备用)，于37℃培养1－2天，纸变黑者为产生HS。

(8)产氨试验

【培养基】葡萄糖蛋白胨液。

【方法】将细菌接种在培养基中，经1－5天后，取培养液5．0毫升，加0．1毫升Nessler’s试剂(碘化钾5．0克，汞2．5克，氢氧化钠16克和水100毫升)，如有氨存在，可见有棕黄色反应是为阳性，不变色者为阴性。

(9)尿素酶试验

【培养基】尿素培养基。

【方法】取细菌接种于尿素培养基1－4天后，当培养基变红时，即表明尿素已被分解，是阳性反应，阴性者应观察4天。

(10)接触酶(过氧化氢酶)试验

【方法】取普通琼脂上的菌落一环，混入一滴盐水中，然后加一滴3%过氧化氢，混合后，有大量气泡者为阳性反应，不产生气泡者为阴性反应。

(11)卵磷脂酶试验

【培养基】10%卵黄琼脂平板。

【方法】将细菌接种在平板上，亦可点种在平板上，于37℃培养3小时，即在菌落周围形成乳白色混浊环，6小时后可扩展至5－6毫米。

(12)凝固酶试验

【方法】

①试管法。取待试菌的菌落数个，混悬于1∶4倍稀释的兔血浆0．5毫升中，37℃培养2－4小时，观察结果凝固者为阳性。此酶是一种游离凝固酶。

②玻片法。取未稀释的血浆及盐水各一滴，分别放在玻片上，挑取待试菌，分别混于血浆和盐水，立即观察，如血浆中有明显颗粒出现，而盐水无自凝现象者为阳性。如玻片法为阴性时，仍应做试管法以最后确诊。

(13)明胶液化试验

【培养基】明胶培养基。

【方法】以接种针挑取培养物，穿刺接种，在20℃下培养1－7天。如室温在20℃以上时，经1－2天后，可放入冰箱，然后观察。凡液化者可以流动，并不再凝固，是阳性反应。