辣根过氧化物酶(HRP，从辣根中提取)

出处：按学科分类—工业技术 企业管理出版社《精细化学品制备手册》第328页（1044字）

制法

(1)处理 选取洗干净的鲜辣根或辣根皮，用刀切成小块，在粉碎机中粉碎成渣浆，将渣浆移入搪瓷缸中。

(2)浸提 在搪瓷缸中，加入1倍于渣浆体积的清水，在10℃左右搅拌提取8～10h，然后以3000r／min的速度离心20min，弃去残渣，收集上清液备用。

(3)盐析将离心后的上清液移入另一搪瓷桶中，在搅拌条件下，缓慢加入硫酸铵粉(按每升离心液加226g硫酸铵计算)，然后置室温下过夜。次日吸取上清液，再按每升上清液加258g硫酸铵粉末，随加随搅拌，待硫酸铵完全溶解后，置10℃处过夜。次日吸取上清液，收集沉淀在冷冻离心机中(13000r／min)离心30min(也可吊滤至干)，弃去上清液，收集盐析物。

(4)透析 把盐析物选用少量去离子水溶解，装入透析袋中，在流动的水中透析2d左右，直至透出的水中加入氯化钡溶液无白色沉淀为止。然后再用无离子水透析10h，收集透析液，在4000r／min下，离心20min，除去杂质，收集上清液。

(5)丙酮分级分离 将以上离心液移入搪瓷桶并置于冷处或冰浴中，在搅拌下，用滴管沿桶壁加入等体积－15℃的丙酮，在4000r／min下，离心20min，收集上清液。在上清液中再加原上清液体积0．8倍的－15℃丙酮，按同样条件离心，弃去上清液，收集沉淀。将沉淀用蒸馏水溶解，装入透析袋中用蒸馏水透析除去丙酮，收集透析液，即得粗HRP。

(6)精制、透析、干燥 将透析液倒入玻璃烧杯中，加入1mol／L的硫酸锌溶液(每升透析液加1ml)，搅拌均匀，以6000r／min的速度离心20min，弃去杂物，收集上清液。分装于透析袋中，于流水中透析24h左右，最后在蒸馏水中透析8～9h。将透析液冷冻干燥，即得精品HRP。本产品为黄色纤维状松软物。

辣根过氧化物酶(HRP)是一种血红素蛋白酶，广泛分布于植物体中，尤其在鲜辣根(十字科蔬菜)中含量最高。HRP是酶工业中使用最普遍的一种酶，它既可用于定位检测，又能用于定量测定。